[发明专利]新加坡石斑鱼虹彩病毒主要衣壳蛋白多克隆抗体的制备和应用

说明书

本发明公开了新加坡石斑鱼虹彩病毒主要衣壳蛋白多克隆抗体的制备和应用。本发明提供了一种含SGIV MCP基因的原核表达载体pET‑32a‑MCP，由SGIV MCP基因插入载体质粒pET‑32a构建得到；所述SGIV MCP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该原核表达载体pET‑32a‑MCP能够表达SGIV MCP重组蛋白，进一步利用该重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备得到了能够特异性地识别SGIV的SGIV MCP多克隆抗体，该多克隆抗体的制备方法简单、成本低，且该多克隆抗体用于SGIV的检测时，检测方法简便、检测结果准确度高、特异性强；因此，该SGIV MCP多克隆抗体在检测SGIV或制备SGIV抗体检测试剂盒中具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域。更具体地，涉及新加坡石斑鱼虹彩病毒主要衣壳蛋白多克隆抗体的制备和应用。

背景技术

石斑鱼(Epinephelus spp.)属于鲈形目、鮨科、石斑鱼属，是我国南方重要的海水经济鱼类，其味道鲜美，营养丰富，深受广大消费者欢迎。然而，随着石斑鱼养殖规模的扩大，严重的病害问题已成为限制石斑鱼养殖业发展的主要瓶颈。病毒性疾病由于突发性强、传播速度快、致死率高，病毒变异性强等，已成为制约水产养殖业健康发展的突出问题。由新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus，SGIV)和神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus，RGNNV)所造成的病毒性疾病在中国以及东南亚流行，严重影响水产养殖业发展。

SGIV是从新加坡患病石斑鱼脾脏中分离鉴定出一株高致病性虹彩病毒，SGIV的主要衣壳蛋白(MCP)分子量为49kDa，对SGIV MCP氨基酸序列与其它虹彩病毒进行系统进化分析，结果显示其与虹彩病毒科蛙病毒属蛙病毒3型(Frogvirus3，FV3)的亲缘关系最近，MCP氨基酸序列相似性为69％；因此，将SGIV列为虹彩病毒科蛙病毒属，并命名为SGIV，第10版国际病毒分类手册中正式把SGIV确定为蛙病毒属的1个新种。该SGIV病毒极易感染我国南方和东南亚等地区的石斑鱼等海水鱼类，造成鱼体脾脏出血和肿大，且鱼体感染后一周以内的致死率可达90％以上。因此，亟需提供能够快速、有效检测SGIV的方法，以尽早控制SGIV对石斑鱼等海水鱼类的危害。

目前，虽然市面上已有SGIV染料法荧光定量PCR试剂盒，但试剂盒是建立在PCR检测原理基础之上的，具有易污染、结果假阳性率较高，仪器设备较为昂贵，用时较长，现场使用不便利等缺点。因此，提供成本低、简便、快速、检测结果准确度高、特异性强的SGIV的检测方法，对于监测并有效控制SGIV对石斑鱼等海水鱼类的危害具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有SGIV检测方法的缺陷和不足，提供新加坡石斑鱼虹彩病毒主要衣壳蛋白多克隆抗体的制备和应用。

本发明的目的是提供一种含SGIV MCP基因的原核表达载体pET-32a-MCP。

本发明另一目的是提供一种SGIV MCP重组蛋白。

本发明又一目的是提供所述原核表达载体pET-32a-MCP或所述SGIV MCP重组蛋白在制备SGIV MCP多克隆抗体中的应用。

本发明再一目的是提供一种SGIV MCP多克隆抗体。

本发明再一目的是提供所述SGIV MCP多克隆抗体的制备方法。

本发明再一目的是提供所述SGIV MCP多克隆抗体或所述方法制备得到的SGIVMCP多克隆抗体。

本发明再一目的是提供所述SGIV MCP多克隆抗体在检测SGIV或制备SGIV抗体检测试剂盒中的应用。

本发明再一目的是提供一种检测SGIV的方法。