[发明专利]生菜作为宿主在表达人乳头瘤病毒蛋白或制备人宫颈癌疫苗中的应用

权利要求书

1.植物作为宿主在表达人乳头瘤病毒蛋白中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物；

所述人乳头瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一种或多种。

2.植物作为宿主在制备人宫颈癌疫苗中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物；

所述人宫颈癌疫苗包括人乳头瘤病毒蛋白；所述人乳头瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一种或多种。

3.一种表达载体，其特征在于，包括人乳头瘤病毒蛋白的核苷酸序列和双元植物表达载体；

所述人乳头瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一种或多种。

4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述人乳头瘤病毒蛋白为HPV16 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.3所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或

所述人乳头瘤病毒蛋白为HPV17 L2，其cDNA序列如SEQ ID No.6所示，氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；或

所述人乳头瘤病毒蛋白为HPV1 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.9所示，氨基酸序列如SEQID No.8所示；或

所述人乳头瘤病毒蛋白为HPV4 L2，其cDNA序列如SEQ ID No.12所示，氨基酸序列如SEQ ID No.11所示；或

所述人乳头瘤病毒蛋白为HPV18 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.15所示，氨基酸序列如SEQ ID No.14所示。

5.根据权利要求3或4所述的表达载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：

步骤1：在人乳头瘤病毒(HPV)的核苷酸序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入Sacl限制性酶切位点；

步骤2：取步骤1获得的修饰后的人乳头瘤病毒的核苷酸序列克隆到载体pUC57载体中，获得克隆载体pUC-HPVs；

步骤3：通过Xbal/Sacl分别从步骤2所得的克隆载体pUC-HPVs中获得基因片段HPV，克隆至双元植物载体pCam35S，获得表达载体p35S-HPVs。

6.根据权利要求3至5任一项所述的表达载体在表达人乳头瘤病毒蛋白中的应用。

7.根据权利要求3至5任一项所述的表达载体在制备人宫颈癌疫苗中的应用。

8.植物作为宿主表达人乳头瘤病毒蛋白的方法，其特征在于，将如权利要求3至5任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得人乳头瘤病毒蛋白；

所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。

9.植物作为宿主制备人宫颈癌疫苗的方法，其特征在于，将如权利要求3至5任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得人宫颈癌疫苗。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：

步骤1：抽真空25～45s；

步骤2：保持真空-95kPa压力30～60s；

步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；

重复上述步骤2～3次，避光处理4d。