[发明专利]重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明获得SVV/FJ/001株全长cDNA，并对其5'UTR进行缺失及突变改造，同时在SVA cDNA中融合进串联的O型FMDV的重组表位基因，构建得到重组口蹄疫抗原表位的塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的口蹄疫B细胞表位和T细胞表位，且表达产物具有良好的反应原性，重组病毒的致病性显著降低甚至对猪无致病性，显著提高了毒株的生物安全性；制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，在有效激发SVA中和抗体的同时还能产生针对FMDV的特异性抗体，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)，也称塞内卡病毒(Senecavirus)、塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)，属于小RNA病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)，也是该属的唯一成员。该病毒感染猪能够引起猪的原发性水泡病，与口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎等引起的临床症状难以区分。SVA感染后能引起断奶仔猪、保育、育肥和繁殖的各年龄段的猪发生水泡性病变，同时伴随跛行、发热、厌食、嗜睡等临床症状，新生仔猪除了上述症状外，还可能存在持续的腹泻、脱水等症状，甚至会突然死亡。

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)属于微RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)的单股正链RNA病毒，包括A、O、C、Asial、SAT1、SAT2、SAT3七个血清型，型间无交叉保护。病毒基因组全长约8.5kb，由5’端非编码区、ORF区和3’端非编码区组成。编码区编码一个多聚蛋白，经病毒自身蛋白酶和宿主细胞蛋白酶作用逐级降解，形成多种中间体和成熟的4种结构蛋白(VP4、VP2、VP3、VP1)和8种非结构蛋白(Lpro、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D)。其中，VP1是结构蛋白基因编码所得的最重要的衣壳蛋白，是决定FMDV抗原性、诱导机体产生中和抗体和激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白，在其G-H环(141～160位氨基酸)和C末端(200～213位氨基酸)存在两个线性表位，已经被证明是是诱导口蹄疫免疫应答的关键抗原表位，其中G-H环上141～160位氨基酸序列合成肽可以在不同物种包括小鼠、兔子、豚鼠、猪、牛、羊等体内诱导产生中和抗体达到免疫保护效果，且也发现其侧翼序列对免疫效果具有一定的影响。200～213位氨基酸序列的合成肽也被证实可以诱发机体产生有效的免疫应答。

另有研究证明，H-2d小鼠对VP1上141～160位抗原位点免疫应答存在限制性，但是，加入外源的T细胞表位多肽后，H-2d小鼠就能克服对B淋巴细胞应答的限制性，诱导产生高水平的中和抗体(Nature,1987,330(6144):168-70)。说明T细胞表位被机体T淋巴细胞识别后，能辅助B细胞的活化和抗体的产生。FMDV的3A蛋白21-35位氨基酸的T细胞表位(JVirol.2001,75(7):3164-3174)已经被证实具有辅助诱导B细胞产生抗FMDV抗体的功能。但是目前未有将FMDV的相关基因应用到制备塞内卡重组病毒或重组疫苗中的研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用，本发明获得SVV/FJ/001株的全长cDNA，并对其5'UTR进行缺失及突变改造，同时在SVAcDNA中融合进串联的O型FMDV的B细胞表位与3A蛋白的T细胞表位基因，构建得到重组口蹄疫抗原表位的塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的O型口蹄疫B细胞表位和T细胞表位，且表达产物具有良好的反应原性，重组病毒的致病性显著降低甚至对猪无致病性，显著提高了毒株的生物安全性；制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，不仅能有效激发SVA的中和抗体，而且能产生针对O型FMDV的特异性抗体，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。