[发明专利]PDCD11-shRNA及其在治疗结直肠癌中的应用

说明书

本发明提出了一种PDCD11‑shRNA，为根据核仁蛋白PDCD11的基因序列设计的针对PDCD11的shRNA分子，能够显著抑制人结直肠癌细胞HCT116的生长。本发明PDCD11‑shRNA的序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的优点是能显著降低HCT116肿瘤细胞内PDCD11的表达水平，显著抑制细胞的增殖速率。因此，本发明设计的shPDCD11分子具有治疗结直肠癌的潜能。

技术领域

本发明涉及一种PDCD11-shRNA及其在作为结直肠癌治疗靶点中的应用，分类号为C12N15/113，属于生物医药技术领域。

背景技术

结直肠癌是目前最常见的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁人类的生命和健康，其发病率位居常见恶性肿瘤的前列，其病死率也居癌症死亡的前列。结直肠癌的发生发展是一个多步骤、多阶段以及多基因参与的过程，其中基因异常表达在结肠癌发生发展过程中又起着重要作用。因此，寻找出新的结直肠癌治疗靶点对疾病的治疗，降低直结肠癌死亡率具有重要的科学意义。

肿瘤靶向治疗是针对肿瘤特异性表达的功能分子，设计开发靶向性的抑制剂，包括抗体、小分子、生物载体等。该类靶向性分子可以特异性抑制肿瘤细胞的生长、运动及化疗抵抗等功能，而对正常的组织细胞不具有破坏作用。因此，靶向治疗可以极大的延长患者的生存时间及生存质量。然而，现阶段可用的靶向治疗靶点有限，可用的靶向药匮乏，只有极少部分患者可以从靶向治疗中受益，因此提供一种新型的肿瘤治疗靶点是目前亟需解决的问题。

核仁是细胞核内合成核糖体RNA和组装核糖体大、小亚基的重要场所（Tan BC, etal. J Biomed Sci. 2012; 19: 57）。核仁蛋白是组成核仁的主要成分，在细胞的蛋白质生物合成中发挥重要作用。研究发现，核仁蛋白能调节细胞增殖（Liu, S. J., et al. WorldJ Gastroenterol. 2004; 10, 1246-1249）、细胞凋亡和细胞周期（Wu, Q., et al. PLoSOne. 2011; 6: e26401）。申请人最近发现，在人结直肠癌细胞中，某些核仁蛋白如RSL1D1高表达，与肿瘤的发生、发展密切相关。

PDCD11 (Programmed cell death 11)是一种核仁蛋白（Scherl A, et al. MolBiol Cell. 2002 13:4100-4109），为18S rRNA的成熟所必需（Sweet T, et al. J CellPhysiol.2008. 214:381-388）。据报道，PDCD11在p53介导的程序性细胞死亡中至关重要（Kevin M.Ryan, et al. Nature. 2000;404: 892-897）。

近年来，RNA干扰技术经历着高速发展，也为癌症治疗带来了新的曙光和革命性的转变。RNA干扰技术作为一种新兴的癌症治疗方法，具有巨大的潜力和发展前景。短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）是一类人工合成的具有紧密的发夹转弯结构的RNA，它可以通过RNA干扰技术的原理沉默靶向基因的表达。因此，为了研究某个治疗靶点在肿瘤治疗中的重要性，通常利用shRNA干扰技术进行评估。设计针对某个靶点的shRNA分子，利用所述shRNA分子干扰靶点的表达，从而影响靶点的功能，然后通过考察所述shRNA分子对细胞增殖速率的影响，评估该分子是否具有潜在的肿瘤治疗效应。

如何利用RNA干扰技术，研究出特异性针对恶性肿瘤细胞的shRNA，为结直肠癌等相关癌症的治疗提供一种有益的途径。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足而提供一种PDCD11-shRNA及其在治疗结直肠癌中的应用，PDCD11-shRNA是以核仁蛋白PDCD11的基因序列为靶标，设计出的特异性shRNA分子，能够达到抑制恶性肿瘤细胞生长的目的。