[发明专利]一株协同产三种抗细菌代谢产物枯草芽孢杆菌JCL16及其筛选和应用

说明书

本发明公开了一株协同产三种抗细菌代谢产物枯草芽孢杆菌JCL16及其筛选和应用，该协同产三种抗细菌代谢产物菌株JCL16，经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏时间为2018年06月01日，保藏编号为CCTCC NO:M2018336。本发明的枯草芽孢杆菌JCL16可以产生三种抗细菌代谢产物分别为：表面活性素Surfactin、溶杆菌素Bacilysin、和SubtilosinA；对加州鲈鱼的病害具有优异的防治效果，尤其是鰤鱼诺卡氏菌导致的加州鲈鱼病害，可用于制成相关的生物制剂和饲料。

技术领域

本发明属于水产养殖病害防治，涉及一株协同产三种抗细菌代谢产物枯草芽孢杆菌JCL16及其筛选和应用，还涉及菌株JCL16产表面活性素，溶杆菌素和SubtilosinA对鰤鱼诺卡氏菌病的防治作用及其在饲料中的应用。

背景技术

加州鲈鱼，学名为大口黑鲈(Micropterus salmoides，Lacepèe 1802)，属鲈形目、鲈亚目、太阳鱼科、黑鲈属，原产为美国加州密西西比河水系。加州鲈鱼主要栖息于混浊度低，且有水生植物分布的水域中，由于其肉质鲜美、生长迅速、易于捕捞，在我国的养殖面积大幅扩增，成为重要的经济鱼类。

鰤鱼诺卡氏菌在水、土壤及活性污泥中分布十分广泛，人和动物在一定条件下均可染病。鰤鱼诺卡氏菌在幼鱼初期感染后通常无明显表征，难以及时发现。感染和发病机制漫长，典型症状和显著性危害通常在成鱼期呈现。鰤鱼诺卡氏菌病在鱼体内的生长繁殖速度很慢，所以其病程很长，尤其在出现症状或引起鱼死亡之前需要很长增殖发育期和漫长的病程。养殖的鱼群感染鰤鱼诺卡氏菌后的会导致产量大大降低，饲料转化很低，死亡率增高，在夏末收获的鱼体况不佳，十分瘦弱。传播疾病的方式多样化，小鱼初期可能由于冰鲜饵料感染或者与病鱼感染传播感染鰤鱼诺卡氏菌，和病鱼或被感染鱼一起饲养也是感染原因之一。

芽孢杆菌是一类具有重要使用价值以及经济价值的微生物，其种类丰富，分布广泛，产生多种生物活性物质。芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，能够产生静止的芽孢以度过恶劣的环境。由于芽孢具有非常强的抗逆性，使其在运输或储藏过程中不容易失活，因而芽孢杆菌是一种较为理想的生物农药。其次，芽孢杆菌营养需求简单、生长速度快，这使得其生产发酵的成本较低，有利于开发成生防菌剂。最为重要的是，大量芽孢杆菌还能够产生多种次级代谢产物，是抗菌活性物质的重要来源。芽孢杆菌的生态适应性良好，可以和多种微生物竞争，有助于控制病原菌，其效果持久、争对性强，展现出良好的应用前景。若能从湖泊、池塘等土壤中分离获得的对加州鲈鱼病具有拮抗作用的芽孢杆菌，对鰤鱼诺卡氏菌的防治具有重要意义。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一株协同产三种抗细菌代谢产物的菌株JCL16，经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，本发明的枯草芽孢杆菌JCL16可以产生三种抗细菌代谢产物分别为：表面活性素Surfactin、溶杆菌素Bacilysin、和SubtilosinA；对加州鲈鱼诺卡式菌病有优异的防治效果。

本发明还提供菌株JCL16的筛选和应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一株协同产三种抗细菌代谢产物的菌株JCL16，经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏时间为2018年06月01日，保藏编号为CCTCC NO:M2018336。该菌株JCL16来源于淮安市水产养殖所土壤中，无菌操作观察培养基上单个菌落的形态，枯草芽孢杆菌JCL16在LB培养基上为圆形，暗白色，不透明，边缘整齐。

其中，所述三种抗细菌代谢产物分别为：表面活性素Surfactin、溶杆菌素Bacilysin、和SubtilosinA。

本发明所述的协同产三种抗细菌代谢产物的菌株JCL16的筛选方法，包括如下步骤：