[发明专利]用于肝癌早期诊断的检测岩藻糖基化载脂蛋白H的ELISA试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于肝癌早期诊断的检测岩藻糖基化载脂蛋白H的ELISA试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括岩藻糖基化载脂蛋白H标准品，载脂蛋白H单克隆抗体包被的酶标板，辣根过氧化物酶(HRP)标记的小扁豆凝集素(HRP‑LCA)，标准品稀释液，样品稀释液，HRP‑LCA稀释液，洗涤液，封闭液，TMB显色液，终止液。采用该试剂盒进行检测的方法包括以下步骤：在载脂蛋白H单克隆抗体包被的酶标板中加待测样品，然后加酶标小扁豆凝集素；并加入显色液，最后加入终止液终止反应，并采用酶联检测仪测定吸光度值。本发明的ELISA试剂盒用于肝癌的早期诊断具有灵敏度好、特异性高，操作简便迅速等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于肝癌早期诊断的检测岩藻糖基化载脂蛋白H的ELISA试剂盒及检测方法。

背景技术

原发性肝癌(PLC)是世界上最为常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，5年生存率只有3％-5％。我国每年死于肝癌的人数占全世界肝癌死亡人数的45％-50％。肝癌的发病机制至今尚未清楚，起病通常比较隐匿，大多数肝癌患者早期无典型的临床症状和表现，一旦出现特异的临床症状时，已经属于中晚期，客观上失去了最佳的治疗时机。因此，早发现、早诊断、早治疗是提高肝癌患者生存率的最佳途径，是肝脏疾病相关学科研究的热点之一。

临床工作中AFP是应用最为广泛的肝癌诊断标志物，已在临床应用30多年。然而，AFP在病毒性肝炎和慢性肝脏疾病中亦可见不同程度升高，诊断特异性不甚理想。而研究表明，岩藻糖基化AFP可与小扁豆凝集素(LCA)特异结合，其具有肝癌特征性，而良性肝病无此改变，因此可用其鉴别良、恶性肝病，甚至有助于肝癌的早期诊断和疗效判断。岩藻糖基化AFP又称AFP-L3。美国FDA在2005批准AFP-L3作为肝癌诊断标志物。但是，许多肝癌患者的AFP水平并不升高(约占40％)，这极大限制了AFP-L3的临床应用。

载脂蛋白H(ApoH)又称为β2糖蛋白1，由Schμltze等人于1961年发现，是作为一种过氯酸可溶性部分存在于人血浆。其分子量50KD，是由326个氨基酸残基组成的单链多肽。ApoH具有寡聚多糖结构，含有5个分支糖胺寡聚多糖侧链，糖链占整个蛋白质分子的19％。研究发现血清中岩藻糖基化的ApoH(Fc-APOH)含量在健康人、慢性肝病患者和肝癌患者血清中逐步降低，且差异显著，提示血清Fc-APOH含量变化与肝癌发生、发展过程密切相关，可作为肝癌早期诊断标志物。其与AFP-L3联合检测，可大大提高肝癌检测阳性率。

但是，现有文献报道中并没有可以快速准确检测Fc-APOH的方法。基于临床研究和市场应用的需求，迫切需要开发一个快速灵敏的检测方法。因此，发明人开发了基于小扁豆凝集素亲和的直接检测岩藻糖基化载脂蛋白H的ELISA检测试剂盒，可作为岩藻糖基化载脂蛋白H定量检测的有效、快速的检测手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于肝癌早期诊断的岩藻糖基化载脂蛋白H的ELISA检测试剂盒及其检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种用于肝癌早期诊断的定量检测岩藻糖基化载脂蛋白H(Fc-APOH)的ELISA试剂盒，所述的ELISA试剂盒包括：(A)岩藻糖基化载脂蛋白H标准品；(B)载脂蛋白H单克隆抗体包被的酶标板；(C)辣根过氧化物酶(HRP)标记的小扁豆凝集素(HRP-LCA)；(D)标准品稀释液、样品稀释液、HRP-LCA稀释液、洗涤液、封闭液、TMB显色液以及终止液。

采用该试剂盒进行检测的方法包括以下步骤：在载脂蛋白H单克隆抗体包被的酶标板中加待测样品，然后加酶标小扁豆凝集素；并加入显色液，最后加入终止液终止反应，并采用酶联检测仪测定吸光度值。