[发明专利]一种肝细胞培养基、培养方法及其用途

权利要求书

1.一种肝细胞培养基，其特征在于，所述肝细胞培养基包括增殖培养基，所述增殖培养基以增殖培养基总量为基础计，包括以下成分：

2.根据权利要求1所述的肝细胞培养基，还进一步包括成熟培养基，所述成熟培养基以成熟培养基的总量为基础计，包括以下成分：

3.根据权利要求2所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述腺苷酸环化酶激活剂为弗斯可林。

4.根据权利要求3所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述弗斯可林的浓度为0.1μM-100μM，优选为1～50μM。

5.根据权利要求1或2所述的肝细胞培养基，其特征在于，所述液体基础培养基为MEM、DMEM、DMEM/F12、RPMI1640、F12中的一种或几种。

6.根据权利要求1或2所述的肝细胞培养基，其特征在于，还包括以下项中的一种或几种：

1)所述半乳糖的浓度为1.0～2.0g/L，优选为1.6～2g/L；

2)所述脯氨酸的浓度为：0.1～1.0g/L，优选为0.1～0.5g/L；

3)所述鸟氨酸的浓度为：0.01～0.3g/L，优选为0.05～0.15g/L；

4)所述烟酰胺的浓度为：0.4～0.8g/L，优选为0.5～0.7g/L；

5)所述转化生长因子α的浓度为10～80ng/mL，优选为20～40ng/mL。

7.一种肝细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)用含FBS的基础培养基培养原代肝细胞，使其贴壁；

2)去除未贴壁的细胞，更换为权利要求1所述的肝细胞培养基中的所述增殖培养基扩增培养；

3)细胞使用前更换为权利要求2-4任一所述的肝细胞培养基中的所述成熟培养基培养。

8.根据权利要求7所述的肝细胞培养方法，其特征在于，步骤3)中细胞使用前5～7天更换成熟培养基。

9.一种体外分离的肝细胞，其特征在于，所述肝细胞为原代肝细胞经权利要求7或8所述的肝细胞培养方法中，采用所述步骤1)和所述步骤2)扩增培养后得到的完全分化的肝细胞，或为原代肝细胞经权利要求7或8所述的肝细胞培养方法培养获得的成熟肝细胞。

10.一种如权利要求9所述肝细胞的用途，其特征在于，所述肝细胞用于体外研究肝细胞死亡机制、增殖机制、肝脏疾病机制、肝细胞疗法、肝细胞移植、制备生物人工肝、肝脏疾病药物的开发、筛选、药理毒理学评价。