[发明专利]一种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物，其特征在于，其由脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸通过氢键结合而成；脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸的质量比为1:25~30；

所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM，包含如序列1所示的DNA序列，该序列通过特定结构的堆积形成DNA框架结构TDM。

2.一种根据权利要求1所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM，其特征在于，所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM的平均尺寸为1~2um；

所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM，包含如序列1所示的DNA序列，该序列通过特定结构的堆积形成DNA框架结构TDM。

3.一种根据权利要求1或2所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM的制备方法，包括以下步骤：

1）连接：包含有脂肪细胞核酸适配体靶向序列的磷酸化DNA模板如序列2所示和如序列3所示的引物混合于DNA连接酶缓冲液中，进行退火处理，退火之后的产物与Ecoli DNA连接酶进行连接反应，形成环化的DNA模板；

2）聚合：将步骤1）中环化的DNA模板与phi29 DNA聚合酶、dNTP和BSA在聚合酶缓冲液中进行聚合反应，反应结束后，反应混合物在设定温度加热终止聚合反应，反应产物洗涤后，得到脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM。

4.根据权利要求3所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中，磷酸化DNA模板浓度为8~12µM，引物的浓度为8~12µM，DNA 连接酶缓冲液由5mM Tris-HCl、1mM MgCl₂、0.1 mM ATP和1 mM二硫苏糖醇组成，Ecoli DNA 连接酶的浓度为50~70U/µL，四者的体积比为(2~4):(5~7):(30~60):(7~9)；退火具体工艺参数为：95℃下保持5 min,然后在2 h之内缓慢降温至室温，连接反应温度为16℃，反应时间为3 h。

5.根据权利要求3所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中，环化的DNA模板的浓度为0.5~0.7 µM，phi29 DNA 聚合酶的浓度为8~12 U/µL，BSA的浓度为（0.04~0.06）%，聚合酶缓冲液由50 mM Tris-HCl、10 mM (NH₄)₂SO₄、10 mMMgCl₂和 4 mM 二硫苏糖醇组成，四者混合的体积比为(45~55):(15~25):(0.5~1.5):(95~105)；聚合反应温度为28~32℃，聚合反应时间为18~30h，设定温度为70~80℃，加热时间为8~12min。

6.一种根据权利要求1所述的脂肪细胞靶向的DNA纳米药物的制备方法，包括以下步骤：

向TDM溶液中加入单宁酸TA设定温度下进行摇床上结合反应，反应完毕后，离心，即可得到脂肪细胞靶向的DNA纳米药物TADN。

7.根据权利要求6所述的脂肪细胞靶向的DNA纳米药物的制备方法，其特征在于，所述的TDM溶液的浓度为0.2~0.4μM，单宁酸TA的浓度为5~15mM，两者的混合体积比为(0.5~1.5): (0.5~1.5)。

8.一种根据权利要求1所述的脂肪细胞靶向的DNA纳米药物在制备减肥药物中的应用。