[发明专利]一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2及其制备方法

权利要求书

1.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述微生物菌剂M2由混合菌液、载体、腐殖酸、硫酸锌、硫酸亚铁以及硫酸钾组成，所述混合菌液由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株按照体积比1:1:1配制的混合菌液，所述载体为鸡粪有机肥；所述三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。

2.如权利要求1所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述载体为鸡粪有机肥，所述鸡粪有机肥中含有氮、五氧化二磷以及氧化钾。

3.如权利要求2所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述微生物菌剂M2包括混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g、鸡粪有机肥30kg，所述微生物菌剂M2中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。

4.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55分别接种到斜面NA培养基上，30～37℃活化培养得到枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落以及贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落，所述斜面NA培养基为固体培养基；所述枯草芽孢杆菌HR15、所述萎缩芽孢杆菌HR37和所述贝莱斯芽孢杆菌HR55三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCCNO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452；

(2)将活化后的枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落和贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落分别接种到装有NA液体培养基中，在30～37℃条件下，180～220rpm/min振荡培养12h，得到枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液；

(3)将步骤(2)中的枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液分别按照6％的接种比例接种到LB液体培养基中，30～37℃条件下，180～220rpm/min振荡培养48～72h得到枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液；

(4)取步骤(3)中的枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液按照体积比1:1:1比例配制得到混合菌液，将混合菌液与腐殖酸、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸钾以及载体混合均匀，配制成微生物菌剂M2粉剂，低温保存。

5.如权利要求4所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述斜面NA培养基为肉汁胨培养基(NA)，包括牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，NaCl0.3％，琼脂15～20g，pH7.2。

6.如权利要求4所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述载体为鸡粪有机肥。