[发明专利]一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法

说明书

本发明公开了一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：构建香菇多糖标准指纹图谱；构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱；通过香菇多糖标准指纹图谱和香菇多糖分子量分布标准指纹图谱共同组成香菇多糖多元指纹图谱，通过香菇多糖多元指纹图谱确定香菇多糖的单糖种类，再进行离子色谱测定香菇多糖含量，得到香菇多糖多元定量指纹图谱。本发明通过多糖定量指纹图谱结合香菇多糖多元指纹图谱，赋予指纹图谱大量的定性、定量信息，共同应用于产品质量控制，对指纹图谱中的多个目标成分进行准确定量，具有很好的紧密度、准确度、重复性和稳定性，使得质量控制更加准确、产品的质量和稳定性更加可靠。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，更具体地，涉及一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法。

背景技术

多糖是由10个或以上单糖通过缩合而形成的链状结构物质。多糖广泛分布于动物、植物和微生物中，对维持生命活动起着至关重要的作用，与蛋白质、核酸、脂类并称为生命四大基础物质。大量研究证实，多糖特别是水溶性多糖常具有良好的生物活性，如抗肿瘤、免疫促进、抗氧化、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂等，其研究开发具有重要意义。多糖分子的构象与多糖分子上支链的位置和数目会影响多糖分子量，同时影响多糖物理化学性质。香菇多糖的极性一般较强，结构相近，均呈多分散性，故不可能像小分子那样可以高分辨、高选择性地直接进行色谱分析。而单一的化学方法或者仪器分析方法难以从多个方面对香菇多糖的生产质量进行快速全面控制。

目前关于多糖的指纹图谱质量控制已有报道，但多采用单一指纹图谱，将多糖水解成单糖，根据单糖种类，利用相对保留时间进行判断，但在水解过程中会破坏多糖的结构，难以对多糖质量进行直观的分析。且因为多糖分子量分布从几千到几十万道尔顿不等，而不同分子量的香菇多糖，在功能性质上也会有所差异，因此对多糖的分子量分布进行分析也极为必要。现有的指纹图谱主要是对多糖水解后的单糖共有峰的指认，确认的是多糖一级结构的信息，缺少多糖分子量分布的信息，而多糖分子量分布会影响多糖的多种活性功能性质，因此难以从这一方面对多糖质量生产进行有效监控。

CN102645504A公开了一种灵芝孢子粉多糖离子色谱指纹图谱的构建方法，主要通过对灵芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解，然后分离水解产物中的单-寡糖组分的离子色谱指纹，得到指纹特征，获得灵芝孢子粉多糖离子色谱指纹图谱。其多糖离子色谱指纹图谱的构建只是考虑了多糖水解产物的特征峰，对于多糖的分子量及其分布缺乏相应的分析，因而构建的指纹图谱也不能实现对多糖准确和稳定的质量控制。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中构建的多糖指纹图谱不能够准确且稳定有效的控制香菇多糖的生产质量的缺陷和不足，提供一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

S1.构建香菇多糖标准指纹图谱：通过离子色谱和/或PMP-HPLC高效液相进行香菇多糖水解单糖的组成检测，构建香菇多糖离子色谱标准指纹图谱和/或香菇多糖PMP-HPLC标准指纹图谱；

S2.构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱：采用高效体积排阻色谱法测定香菇多糖的分子量，利用标准品进行较正，对多糖的分子量进行分段切割，构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱；

S3.通过上述S1的香菇多糖标准指纹图谱和S2的香菇多糖分子量分布标准指纹图谱共同组成香菇多糖多元指纹图谱，通过香菇多糖多元指纹图谱确定香菇多糖的单糖种类，再进行离子色谱测定香菇多糖含量，得到香菇多糖多元定量指纹图谱。

本发明提供的香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法可以从两个方面对香菇多糖质量控制进行表征：