[发明专利]一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.构建香菇多糖标准指纹图谱：通过离子色谱和/或PMP-HPLC高效液相进行香菇多糖水解单糖的组成检测，构建香菇多糖离子色谱标准指纹图谱和/或香菇多糖PMP-HPLC标准指纹图谱；

S2.构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱：采用高效体积排阻色谱法测定香菇多糖的分子量，利用标准品进行较正，对多糖的分子量进行分段切割，构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱；

S3.通过上述S1的香菇多糖标准指纹图谱和S2的香菇多糖分子量分布标准指纹图谱共同组成香菇多糖多元指纹图谱，通过香菇多糖多元指纹图谱确定香菇多糖的单糖种类，再进行离子色谱测定香菇多糖含量，得到香菇多糖多元定量指纹图谱。

2.如权利要求1所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中香菇多糖水解单糖的制备方法如下：

取多糖样品加入三氟乙酸微波水解，其中：三氟乙酸浓度为2.0～3.0mol/L，微波酸水解的料液比：20mg多糖样品/5～7mL三氟乙酸溶液，微波酸水解的水解温度120～130℃，水解时间25～30min，水解功率为1000～1400W。

3.如权利要求2所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中香菇多糖水解单糖的制备方法如下：取多糖样品加入三氟乙酸微波水解，其中：三氟乙酸浓度为3.0mol/L，微波酸水解的料液比：20mg多糖样品/7mL三氟乙酸溶液，微波酸水解的水解温度130℃，水解时间30min，水解功率为1000W。

4.如权利要求2或3所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中所述离子色谱和/或PMP-HPLC高效液相的单糖标样中的单糖包括岩藻糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖。

5.如权利要求4所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中离子色谱仪检测的条件为：色谱柱为Thermo CarboPacPA20或PA10高效阴离子交换色谱柱，柱温为25～35℃，流动相为3～5mmol/L氢氧化钠溶液，流动相流速为0.5～1.0mL/min，以脉冲安培检测器检测，检测器电位波形采用糖标准四电位波形。

6.如权利要求5所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中离子色谱仪检测的条件为：色谱柱为Thermo CarboPacPA20高效阴离子交换色谱柱，包括分析柱(150mm×3mm id)和保护柱(30mm×3mm id)，柱温为30℃，进样体积：20μL，流动相为3.75mmol/L氢氧化钠溶液，流动相流速为0.5mL/min，以脉冲安培检测器检测，检测器电位波形采用糖标准四电位波形。

7.如权利要求4所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中PMP-HPLC高效液相检测的条件为：

色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18；

流动相：磷酸盐缓冲液-乙睛溶液，其中磷酸盐缓冲液和乙睛的体积比为80:20，磷酸盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH为6；

柱温：30℃；检测器：紫外检测器；检测波长：245nm；流速：0.8mL/min；

进样体积：10μL。

8.如权利要求1所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S2中高效体积排阻色谱法的色谱条件为：

色谱柱：Waters Ultrahydrogel 500+Waters Ultrahydrogel 2000；流动相：0.1MNaNO3；流速：0.8mL/min；柱温：45℃。

9.如权利要求7所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S2中所述构建香菇多糖分子量分布标准指纹图谱的香菇多糖分子量标准曲线的标准品为5种不同分子量的右旋糖苷，其分子量分别为：MW 135350、MW 36800、MW 9750、MW 2700、MW 180。

10.如权利要求4所述香菇多糖多元定量指纹图谱的构建方法，其特征在于，S3中所述香菇多糖含量为各单糖含量除以相应单糖回收系数的总和，其中单糖回收系数通过如下方法确定：

称取20mg岩藻糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖微波水解后，按S1中离子色谱条件进行分析，采用外标法计算水解后各单糖的含量，确定各单糖在水解过程中的回收系数。