[发明专利]一种靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针及其检测方法

权利要求书

1.一种靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针，其特征在于，所述多肽探针包括靶向多肽序列Gly-(Hyp-Hyp-Gly)n和修饰所述靶向多肽N端的发光物质X，所述多肽探针的序列为X-Gly-(Hyp-Hyp-Gly)n，n为8-10之间的整数。

2.如权利要求1所述的靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针，其特征在于，所述X为荧光素类分子、香豆素类分子、罗丹明类分子、菁染料类分子、BODIPY类分子、方酸类分子、磷光分子、半导体量子点、碳量子点、硅量子点、硫量子点、磷量子点、钙钛矿量子点、上转化稀土纳米材料、长余辉纳米材料中的一种或几种。

3.如权利要求2所述的靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针，其特征在于，所述X为羧基荧光素FAM。

4.如权利要求1-3任一所述的靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：固相合成靶向多肽序列，再将发光物质修饰到该靶向多肽序列的N端。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述固相合成靶向多肽序列的方法为：

a）将80-250mg的树脂加入具有筛板的反应器中，使用2-8mL二氯甲烷溶胀树脂；

b）由15-25％哌啶/N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液脱除N端Fmoc保护基，通过显色反应来检测保护基的脱除程度；

c）将N端由Fmoc保护的氨基酸 4eq与HOBt 4eq和HBTU 4eq由DMF溶解，低温活化10-30min后，向溶液中滴加DIEA 6eq，溶液混合均匀后加入到反应器中，反应1-6hrs；

d）反应结束后，反应液由反应器中抽出，树脂分别由2-8mL DMF和DCM洗2-4次，显色反应检测氨基酸缩合完全，树脂由15-25％哌啶/DMF溶液处理3次，分别为5min、5min和15min，树脂分别由5mL DMF和DCM洗3次，显色反应检测保护基脱除完全；

e）之后重复步骤c）和d），直到合成目标序列的多肽，显色反应检测反应完全后，树脂分别由3-8mL DMF和DCM洗2-4次；

f）称取发光物质4eq、HOBt 4eq和HBTU 4eq，由DMF溶解，低温活化10-30min后，向溶液中滴加DIEA 4-10eq，混合液加入到多肽溶液中，避光反应12-48hrs；

g）树脂分别用DCM和甲醇轮流洗涤2-5次，然后将树脂抽干，加入切割液，切割液的组分为TFA:水的体积比为95:5，反应1-6hrs；

h）向反应液加入冰乙醚中，将多肽沉淀，然后通过离心收集沉淀，用TFA溶解沉淀，加入过量冰乙醚再次沉淀并离心收集沉淀，沉淀用冰乙醚洗涤2-4次后干燥，得到粗肽，粗肽由反相液相色谱纯化得纯肽。

6.如权利要求1-3任一所述的靶向识别变性胶原蛋白的多肽探针在制备成像试剂中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述成像试剂包括体外组织成像试剂和体内成像试剂。