[发明专利]一种角蛋白CK19-2G2检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域的一种角蛋白CK19‑2G2检测试剂盒及其使用方法，包括相互独立包装的抗试剂A、抗试剂B、校准品、质控品、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；本发明还涉及该试剂盒的制备方法以及应用该试剂盒定量检测人体血清中的角蛋白CK19‑2G2含量的方法；试剂盒性能可靠、灵敏度高、线性范围宽，可配合半自动、全自动仪器使用。

技术领域

本发明涉及医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，特别涉及一种角蛋白CK19-2G2检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

细胞角蛋白19(CYFRA21～1)细胞角蛋白是细胞体的中间丝，根据其分子量和等电点不同可分为20种不同类型，角蛋白19是一种分化特异的蛋白质，分子量约40kD，广泛存在于上皮细胞，是组成细胞骨架的蛋白质之。在上皮细胞恶性转化过程中激活的蛋白酶加速角蛋白19的降解，使得大量角蛋白19片段释放入血循环中。

其中，细胞角蛋白19在肺癌诊断中有很大价值，是非小细胞肺癌的重要标志物，其为一种相对分子量40kD、等电点5.2的酸性蛋白，主要分布在单层和假复层上皮细胞。在肺癌的血清浓度阈值为2.2μg/L，其敏感性、特异性及准确性分别为57.7％、91.9％和64.9％。从组织学角度看，鳞癌的敏感性(76.5％)较腺癌(47.8％)为高，也高于SCC对两者的诊断率。细胞角蛋白19与CEA联合应用，诊断非小细胞肺癌符合率已可达到78％。在宫颈癌、膀胱癌、乳腺癌也有一定的阳性率，有报道称33％的慢性肾功能衰竭患者CYFRA21～1升高。

角蛋白CK19-2G2(Cytokeratin19，CK19-2G2)角蛋白CK19-2G2浓度与肿瘤病程进展、转移密切相关。角蛋自CK19-2G2片段是单抗2G2结合位点(细胞角蛋白19aa375～400)与单抗5H2结合位点(细胞角蛋白19aa325～350)之间的细胞角蛋白19片段。被检测片段为细胞角蛋白19aa325～400，分子量约为9kD。

在国内，角蛋白CK19-2G2(CK19-2G2)检测临床上主要以酶联免疫吸附试验(ELISA)为主为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及，且技术灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。

因此，有待开发对角蛋白CK19-2G2(CK19-2G2)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。

发明内容

针对现有技术存在的角蛋白CK19-2G2检测试剂成本高、不利于高通量的全自动检测的技术问题，本发明提供一种角蛋白CK19-2G2(CK19-2G2)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)及其使用方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，包括相互独立包装的抗试剂A、抗试剂B、校准品、质控品、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；

所述抗试剂A通过包括以下步骤的操作制得：

Sa1：用缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为浓度1.0～5.0mg/mL的溶液；

Sa2：向Sa1制得的溶液中加入角蛋白CK19-2G2抗体，室温下搅拌1～2h；

Sa3：使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sa2所得产物进行洗脱、平衡，制得异硫氰酸荧光素标记的CK19-2G2包被抗体；

Sa4：将所述异硫氰酸荧光素标记的CK19-2G2包被抗体加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中即得；

所述抗试剂B通过包括以下步骤的操作制得：

Sb1：用缓冲液将碱性磷酸酶配制为浓度1.0～5.0mg/mL的溶液；