[发明专利]一种角蛋白CK19-2G2检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的抗试剂A、抗试剂B、校准品、质控品、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；

所述抗试剂A通过包括以下步骤的操作制得：

Sa1：用缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为浓度1.0～5.0mg/mL的溶液；

Sa2：向Sa1制得的溶液中加入角蛋白CK19-2G2抗体，室温下搅拌1～2h；

Sa3：使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sa2所得产物进行洗脱、平衡，制得异硫氰酸荧光素标记的CK19-2G2包被抗体；

Sa4：将所述异硫氰酸荧光素标记的CK19-2G2包被抗体加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中即得；

所述抗试剂B通过包括以下步骤的操作制得：

Sb1：用缓冲液将碱性磷酸酶配制为浓度1.0～5.0mg/mL的溶液；

Sb2：向Sb1制得的溶液中加入角蛋白CK19-2G2抗体，室温下搅拌4～5h；

Sb3：使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sb2所得产物进行洗脱、平衡，制得碱性磷酸酶标记的CK19-2G2抗体；

Sb4：将所述碱性磷酸酶标记的CK19-2G2抗体加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中即得；

所述校准品和所述质控品的成分相同，且均通过包括以下步骤的操作制得：用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释CK19-2G2抗原的缓冲液溶液；

所述磁微粒试剂通过包括将抗异硫氰酸荧光素抗体与磁微粒偶联的操作制得；

所述发光底物为经过缓冲液稀释的ALPS发光底物。

2.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：Sa2、Sb2的操作中，至少有一处在避光环境中进行。

3.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：所述Tris盐缓冲液包括以下浓度的组分：Tris盐0.1～0.4mM、四环素0.02～0.05％、绵羊血清1～5％、新生牛血清3～10％和马血清1～5％。

4.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂选自Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂在所述Tris盐缓冲液中的浓度为0.01～0.5％。

5.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：所述含牛血清白蛋白的缓冲液包括以下浓度的组分：BSA6％、防腐剂四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％；所述含牛血清白蛋白的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。

6.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制得：

Sc1：将羧基磁珠浓缩液充分混匀置于磁场中12～18min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清；

Sc2：向Sc1制得的羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磷酸缓冲液，混匀20～30min，再置于磁场中12～18min，待所述羧基磁珠全部沉降后吸去上清；然后重复本步操作0～3次；

Sc3：用所述磷酸缓冲液将所述羧基磁珠溶液定容到10～50mg/mL；

Sc4：按照所述羧基磁珠:CK19-2G2抗体为100:(1～2)的比例，向Sc3制得的溶液中加入所述CK19-2G2抗体，保持混匀状态下2～8℃反应16～20h，制得磁珠-抗体溶液；

Sc5：在磁场中将所述磁珠-抗体溶液中的溶质完全沉降后，用所述磷酸缓冲液清洗0～3次后再用所述磷酸缓冲液将所述溶质定容为8～12mg/mL。

7.根据权利要求1所述的角蛋白CK19-2G2检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物通过包括以下步骤的操作制得：按1:4～1:10的比例将所述ALPS发光底物稀释至pH9.5的含有以下组分的缓冲液中：Tris0.1～1M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％。