[发明专利]人丁酰胆碱酯酶的制备方法及其组合物

说明书

本申请实施例提供一种人丁酰胆碱酯酶的制备方法及其组合物，其中的制备方法包括纯化处理，所述纯化处理包括：将人丁酰胆碱酯酶原料进行亲和层析，收集目标峰洗脱液；将所述亲和层析收集的所述目标峰洗脱液进行硫酸铵盐析，得到硫酸铵沉淀物；将所述硫酸铵沉淀物进行疏水层析，收集目标峰洗脱液。本申请的制备方法适用于多种来源的人丁酰胆碱酯酶的制备。

技术领域

本申请属于生物制品技术领域，尤其涉及一种人丁酰胆碱酯酶的制备方法及其组合物。

背景技术

20世纪40年代晚期和50年代早期，有机磷化合物(Organophosphorus Compounds，OPs)随着其作为杀虫剂、杀菌剂和除草剂在使用中产生的巨大效益，被广泛应用于农业生产和家用消毒。在今天，发达国家有机磷化合物的消耗依然高达全球总产量的38％，美国全年的消耗量超过4千万千克，而我国的农药产量约占世界总产量的三分之一，使用的种类一半以上都是有机磷化合物。在长达几十年的时间里，有机磷农药的广泛使用造成生态环境的严重污染，威胁到了人类和动物健康。据WHO估计每年因职业性、意外或故意接触有机磷毒物而致有机磷中毒约300万例，尤其在亚洲国家每年死于有机磷中毒的有25万例，以农村地区显著。此外，神经性化学战剂也是有机磷化合物。尽管化学武器条约已经禁止使用神经性毒剂，但是在近期的一些战争中，神经性毒剂的使用均造成大规模人群的伤亡。有机磷化合物尤其是剧毒的有机磷神经性毒剂，还常被恐怖组织和恐怖分子用于暗杀和威吓。

所有的有机磷毒物其急性毒性反应都是不可逆抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)后的结果。AChE酶的抑制导致外周和中枢神经系统胆碱能神经突触中的乙酰胆碱(ACh)浓度增加。大量ACh的蓄积会导致在神经肌肉接头的胆碱能受体过度刺激，以及改变呼吸中枢的功能，造成胆碱能危象，从而引起肌肉无力、分泌物增加、呼吸抑制、癫痫、昏迷、惊厥乃至危及生命，通常因呼吸衰竭导致死亡。目前有机磷毒物的防治药物主要是对症治疗，比如阿托品抗胆碱能药物拮抗因神经突触中ACh蓄积导致的胆碱能危相，解磷定等肟类化合物重活化神经性毒剂抑制的AChE，此外抗惊厥药物用于控制神经性毒剂诱发的震颤和惊厥。因此现有的抗毒药物并不能直接清除毒物，导致它们不能保护神经性毒剂暴露后可能的致残，惊厥，生理和意识上的失能，如果反复发作会造成持久性脑损伤，和有机磷中毒迟发性周围神经病。

国内外研究表明有机磷毒物的抗毒酶是一类最有希望的毒剂生物清除剂，其抗毒机制非常明确，与有机磷毒物直接作用，中和或催化水解有机磷毒物，因此在抗毒机制上明显优于现有抗毒药。人乙酰胆碱酯酶(Human Acetylcholinesterase，HuAChE)和人丁酰胆碱酯酶(Human butyrylcholinesterase，HuBChE)是现阶段用于生物防护有机磷毒物中毒的两种候选酶，因为AChE和BChE对多种有机磷化合物的毒性立体异构体具有很高的结合反应性和优先选择性。其中HuBChE可以广谱抗有机磷毒物，包括神经性毒剂沙林、梭曼、塔崩和VX，在毒剂暴露前后，安全高效生物防护生物个体，目前被认为是最适合人用的有机磷毒物生物清除剂

人血清丁酰胆碱酯酶是人血浆中天然存在的同源四聚体糖蛋白，因此可以从人血浆中纯化供人类使用的毒剂生物清除剂。Cohn F-IV是人血浆生产人白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子等血液生物制品后的副产品，HuBChE主要存在于Cohn F-IV组分中。基于亲和层析和阴离子交换层析，可以纯化从血浆来源的HuBChE。但是在实际生产过程中存在周期长，阴离子交换层析效率低的缺点。而且在纯化其他组织来源的HuBChE或重组HuBChE时，阴离子交换层析的低pH缓冲体系以及低效率，使得HuBChE的纯度和回收率都较低。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种人丁酰胆碱酯酶的制备方法及其组合物，能够适用于不同来源HuBChE和重组HuBChE的生产制备。

本申请实施例提供一种人丁酰胆碱酯酶的制备方法，包括纯化处理，所述纯化处理包括：

将人丁酰胆碱酯酶原料进行亲和层析，收集目标峰洗脱液；