[发明专利]一种基于双目标驱动DNA逻辑门封孔的介孔硅控释体系

权利要求书

1.一种基于双目标驱动DNA逻辑门封孔的介孔硅控释体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）介孔二氧化硅纳米粒子MSNPs的制备；

（2）羧基修饰的MSNPs的制备；

（3）药物装载及封孔；

步骤（3）所述药物装载及封孔具体包括：

1）MSNPs-FP的制备：取5 mg 羧基修饰的MSNPs置于400μL pH=7.2-7.4的10×PBS缓冲液中，超声分散30min 得到均匀的混合液；分别称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺各5mg加入到混合液中，混匀；将混合液置于37℃环境下30min以活化-COOH；使用10×PBS缓冲液配置100μl 100μM的固定链FP，将固定链加入到混合物中并在37℃下震荡12小时，将产物洗涤三次以除去未反应的固定链，10000rpm离心3min收集最终产物MSNPs-FP；

2）MSNPs@rhB-FP/TP的制备：将纯化的MSNPs-FP溶解于500μl 10×PBS缓冲液中，向溶液中加入0.5 mM rhB，并在37℃下震荡24小时以完成rhB的装载，离心收集产物，将产物溶解于400μl 10×PBS缓冲液中，再加入100μl 含10mM MgCl₂的100μM 10×PBS缓冲液配置的目标链TP，37℃下震荡3h，最后，10×PBS缓冲液洗涤七次，除去表面上物理吸附的rhB，离心收集产物MSNPs@rhB-FP/TP；

3）MSNPs@rhB-FP/TP/AP的制备：将MSNPs@rhB-FP/TP溶于400μl 10×PBS缓冲液中，再加入100μl 含10mM MgCl₂ 100μM 10×PBS缓冲液配置的配体链AP，37℃下震荡3小时，10×PBS缓冲液洗涤三次，离心收集最终产物MSNPs@rhB-FP/TP/AP；

步骤1）中所述固定链FP的核苷酸序列为：5’-TCCAAGTATGCCAAAGAC-3’；在固定链的5’端修饰氨基，3’修饰淬灭基团BHQ2；

步骤2）中所述目标链TP的核苷酸序列为：5’- CCTCCTTCCAGCGAGTGTCTTTGGCATACTTGGAGATTGT -3’；

步骤3）中所述配体链AP的核苷酸序列为：5’- ACTCGCTGGAAGGAGGCGTTATGAGGGGGTCCATTTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG -3’；所述配体链的5’端修饰荧光基团Cy3，序列部分包括斜体部分的ATP适配体序列和粗体部分的AS1411适配体部分。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：步骤（1）所述介孔二氧化硅纳米粒子MSNPs的制备具体为：取十六烷基三乙基溴化铵0.052g溶于25ml含有14mM NaOH的蒸馏水中，将蒸馏水加热至95℃；温度稳定后，将2ml 正硅酸乙酯缓慢加入蒸馏水中，剧烈搅拌3h；过滤得到白色产物，用水和乙醇交替洗涤；最后，将产物在真空下干燥并在550 ℃下煅烧得到MSNPs。

3.根据权利要求1所述的的构建方法，其特征在于：步骤（2）所述羧基修饰的MSNPs的制备具体为：将200mg MSNPs置于20ml 含有0.15mM 硅烷偶联剂的无水甲苯溶液中，加热搅拌回流10小时，离心得到沉淀，将沉淀加入到含有120mg琥珀酸酐和120mg三乙胺的100mL二甲基亚砜溶液中，并在40℃下搅拌48小时，离心回收颗粒，用乙醇洗涤并在真空下干燥以获得羧基修饰的MSNPs。

4.一种如权利按要求要求1-3所示构建方法获得的基于双目标驱动DNA逻辑门封孔的介孔硅控释体系。

5.如权利要求4所述的基于双目标驱动DNA逻辑门封孔的介孔硅控释体系在制备检测ATP，靶向给药和细胞成像的药物中的应用。