[发明专利]一种基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法及其应用

权利要求书

1.一种基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法，所述方法包括以下步骤：

1)合成用于光热转染的基材；

2)用聚醚亚胺(PEI)包被含有编码Halotag蛋白(HTP)的基因序列的质粒，并将所述质粒置于步骤1)中所述基材的表面；

3)制备改性的树突状细胞；

4)合成功能性糖聚物分子；

5)将步骤4)中所述功能性糖聚物分子和步骤3)中所述的改性的树突状细胞混合并进行孵育，得到功能性糖聚物分子改性的树突状细胞。

2.根据权利要求1所述的基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法，其特征在于，步骤1)中所述基材的制备方法为：

将柔性基材和交联剂以50：1～5:1的质量比混合均匀，加入柔性基材0.5‰～10‰的纳米粒子后再次混合均匀，加热固化成膜，从而得到用于光热转染的基材；

优选的，所述柔性基材和所述交联剂的质量比为10：1，加入柔性基材10‰的纳米粒子，所述纳米粒子为多壁碳纳米管(MCNT)、石墨烯、金纳米粒子和聚多巴胺纳米粒子组成的组中的一种以上，所述柔性基材为热固性塑料和水凝胶组成的组中的一种以上；更优选的，所述纳米粒子为多壁碳纳米管(MCNT)，所述柔性基材为聚二甲基硅氧烷(PDMS)。

3.根据权利要求1或2所述的基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法，其特征在于，步骤2)中所述质粒的浓度为0.5～2μg/10⁴个细胞，并且所述质粒置于步骤1)中所述基材表面的时间为1～3h；优选的，所述质粒的浓度为1.5μg/10⁴个细胞。

4.根据权利要求1～3任一项所述的基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法，其特征在于，步骤3)的具体操作为：将树突状细胞接种在步骤2)中包含所述质粒的基材的表面，待树突状细胞贴壁后，再次加入用PEI包被含有编码HTP的基因序列的质粒，并在激光下进行转染，细胞连续培养36h～60h；

其中所述树突状细胞的接种密度为10⁴～10⁵个/cm²，所述激光强度为1～10W/cm²，所述激光的照射时间为5～60s；优选的，所述树突状细胞的接种密度为5×10⁴个/cm²，所述激光强度为1～4W/cm²，所述激光的照射时间为20～60s；更优选的，所述激光强度为2W/cm²，所述激光的照射时间为30s。

5.根据权利要求1～4任一项所述的基于细胞膜表面改性技术的树突状细胞的改性方法，其特征在于，步骤4)中所述功能性糖聚物分子的制备方法为：

(i)合成中间产物：以2-(2-Boc-氨基乙氧基)乙醇、无水四氢呋喃(THF)、无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、氢化钠(NaH)、6-氯-1-碘己烷(6-chloro-1-iodohexane)为原料进行反应，分离纯化后进行脱保护，合成中间产物；

(ii)合成含有氯代烷烃结构的链转移剂：将链转移剂、NHS和DCC溶于无水DMF中，置于28～32℃的条件下反应10～15h，当反应体系中所述链转移剂原料点消失后，原位加入步骤(i)中合成的中间产物，于25～35℃下反应过夜，将反应后得到的溶液经水洗浓缩和纯化，得到含有氯代烷烃结构的链转移剂；

(iii)将(ii)中所述含有氯代烷烃结构的链转移剂和糖单体、引发剂置于60～80℃下反应10～12h进行聚合反应，反应结束后将反应液转移至截留分子量3500Da的透析袋中进行透析，冷冻干燥后得到功能性糖聚物；

优选的，所述链转移剂为选自由脂肪族硫醇、十二烷基硫醇、水、醚、酸、酯和醌二氧化碳、氧、醇和有机酸组成的组中的一种以上；所述糖单体选自由双键修饰的甘露糖(胺)、葡萄糖(胺)、半乳糖(胺)、果糖(胺)、阿拉伯糖(胺)、核糖(胺)、木糖(胺)、来苏糖(胺)、甘油醛组成的组中的一种以上；所述引发剂为偶氮类引发剂；

更优选的，所述链转移剂为4-氰基戊酸二硫代苯甲酸(CPADB)；所述糖单体为N-甲基丙烯酰甘露糖胺(MAM)；所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)。