[发明专利]一种同时检测烟叶中13种物质含量的方法

说明书

本发明实施例公开了一种同时检测烟叶中13种物质含量的方法，属于分析检测技术领域。所述方法包括以下步骤：样品预处理；样品提取；用双柱串联‑液相色谱‑质谱法对样品进行分离检测；采用样品的峰面积和标准曲线进行定量分析。本发明能同时分析烟叶中13种物质含量，对新烟叶品种的培育有着重要的科研意义，同时对各类烟叶的品质鉴定有着广泛的应用前景。同时检出限低，灵敏度高，对于痕量烟碱成分能有效进行检测鉴定；准确定量范围较大，适合同一种提取方法下，不同种类和不同生长阶段的烟叶中烟碱的分析鉴定。

技术领域

本发明实施例涉及分析检测技术领域，具体涉及一种同时检测烟叶中13种物质含量的方法。

背景技术

在烟叶/烟草成分的检测中，尼古丁(NT)、尼古丁代谢产物(HC、CT、NNT、AT、AB)以及烟草特有的亚硝胺类致癌物质(NNN、NNK、NAT、NAB)为常见的检测目标物。为了降低与吸烟相关的疾病风险，当今许多科研者利用生物转化的方法，开发研究低NT含量的烟叶。最新研究表明，6-HN、2-HN、AK为三种重要的NT代谢物，是研究低NT的关键生物标记物，对新烟叶品种的培育有着重要的科研意义。因此，建立NT、CT、HC、NNT、AT、AB、AK、2-HN、6-HN、NNN、NNK、NAT、NAB的同时快速检测方法对烟叶新品种培育和各类烟叶的品质鉴定有着广泛的应用前景。

传统的滴定法、紫外-可见分光光度法、水蒸气测定法可检测烟碱的含量。然而这些方法只能检测出烟碱的总量，且要求的化学反应试剂繁多，测定也易受很多环境因素影响。GC-MS(气相色谱法-质谱联用)的方法被用于检测烟叶中烟碱及一些代谢物，然而其操作方法复杂，稳定性较差。近几年，对NT及其代谢物的检测集中于LC-MS/MS(液相色谱-质谱/质谱联用)。然而，大多数方法只检测NT及其手性化合物；或同时检测NT、CT、HC、NNT、AT、AB、NNN、NNK、NAT、NAB。

如下列举两种常见的烟叶检测方法：

方法一：使用反相LC和WatersBEHC18色谱柱(2.1×50mm，1.7μm)。在35℃柱温条件下进行分离，流动相组成为：A(0.2mmol/L乙酸铵水溶液)B(0.2mmol/L乙酸铵的甲醇溶液)，流速为0.6mL/min。梯度洗脱程序如下：第0-1min，0％流动相B，第1.0-2.1min，流动相B从0％线性增加到60％，然后在接下来的0.9min中，流动相B增加到100％。总运行时间为4min，包括1min的平衡时间(McGuffey,J.E.,Wei,B.,Bernert,J.T.,Morrow,J.C.,Xia,B.,Wang,L.,Blount,B.C.(2014).ValidationofaLC-MS/MSmethodforquantifyingurinarynicotine,sixnicotinemetabolitesandtheminortobaccoalkaloids--anatabineandanabasine--insmokers'urine.PLoSONE,9(7),e101816.)。该方法可同时检测NT、CT、NNT、AT、AB、二烯烟碱、米喔斯明烟碱，而AK、2-HN、6-HN并未包括在其中。