[发明专利]一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株

说明书

本发明涉及一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株，所述的病毒株为CV‑A5‑M14‑611，其完整氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明还涉及一种柯萨奇A组5型(CV‑A5)病毒株的弱毒株株系CV‑A5‑M14‑111，其完整氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还涉及所述病毒株在制备评价治疗手足口病疫苗和/或药物的动物模型中的应用和所述病毒株在制备评价手足口病疫苗保护效果的制剂中的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株。

背景技术

手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒血清型引起的法定丙类传染性疾病。 HFMD多发于5岁以下儿童。目前研究表明EV-71、CV-A6、CV-A10、CV-A16、CV-A5是引起HFMD的 主要病原体。柯萨奇病毒A和B(Coxsackievirus A and B)组中其它肠道病毒血清型也是引起HFMD爆 发和散发的病原体^[1]。

CV-A5属于小RNA病毒科肠道病毒属，直径约为27-30nm，病毒颗粒呈20面对称球形，核心含约 7400核苷酸残基单股正链RNA基因组。据文献报道，CV-A5常见在亚热带地区引起HFMD，疱疹性咽峡 炎(Herpangina,HA)和脱甲症。本实验室2016-2017年在湖北省襄阳市部分地区收集了3703份HFMD患儿 临床样本，通过核酸分型确诊CV-A5阳性样本共147份，占比3.94％^[2]，呈爆发流行特征。通过软件分析 CV-A5襄阳流行株基因组全序列，结果显示P1区与原型株同源性较高，而P2、P3区与其它肠道病毒血清 型发生重组，并且为新的CV-A5重组株，引发了较高病例数的流行。为了更全面的预防手足口病，需要研 发包含CV-A5在内的多种肠道病毒抗原的多价手足口病疫苗。

动物感染模型是评价候选疫苗效力的最有效的工具。其中，通过小鼠感染模型评价EV-71、CV-A16、 CV-A6、CV-A10全病毒灭活疫苗及相应的病毒样颗粒的保护效力已有较多报道^[3-4]。肠道病毒动物感染模 型常规构建主要是通过乳鼠体内反复传代获得突变株。而未经过小鼠体内适应病毒仅感染1-3日龄鼠，并 且实验操作难度系数增大，非特异性死亡比例高，且仅能用于被动免疫-攻毒模型的疫苗保护效力评价。目 前文献也有EV-71感染大日龄免疫缺陷鼠构建感染模型的报道^[5]。CV-A5及其它血清型大日龄小鼠感染攻 毒株的选育，可用于主动免疫-攻毒后的疫苗保护效力评价，高度模拟疫苗免疫后的免疫应答及抗病毒感染 及疾病预防的效力。目前CV-A5病毒分子流行病学、免疫原性研究、致病机理、病毒感染机体的机制、病 毒与细胞受体结合机理尚未阐明。CV-A5疫苗的体内效力评估有赖于合适的动物模型，因此建立成熟稳定 的动物模型显得格外重要。而缺乏合适的用于筛选、评价抗病毒药物的CV-A5感染小鼠模型，也是药物研 发过程中亟待解决的一个重要瓶颈。

参考文献

1.Chen KT,Chang HL,Wang ST,et al.Epidemiologic features of hand-foot-mouth disease and herpangina caused by enterovirus 71in Taiwan,1998-2005[J].Pediatrics,2007,120(2):e244-52.

2.孟晓丹等.2016年-2017年襄阳市手足口病流行病和病原学研究.武汉生物制品研究所，未发表.

3.Ku Z,Liu Q,Ye X,et al.A virus-like particle based bivalent vaccineconfers dual protection against enterovirus 71and coxsackievirus A16infections in mice[J].Vaccine,2014,32(34):4296-303.