[发明专利]游离D型氨基酸的富集检测方法

说明书

本发明公开了一种游离D型氨基酸的富集检测方法，方法包括待测样品的制备、待测样品中DL‑氨基酸的富集，待测样品中氨基酸对映异构体的分离、检出、以及定量。本发明方法成功在手性柱上分离了20对DL‑氨基酸，在实例中也成功用于茶叶中D‑氨基酸的定性定量分析。检测方法只使用了简单流动相，前处理简单，容易操作，可实现对茶叶中D‑氨基酸精确定性定量分析，具有分离速度快，无需衍生化的优点，提高了检测的效率降低了成本。若需测定食品、饮料、药品、或动植物样品中D型氨基酸，可以依照本发明的指导进行检测或在此基础上进行相应的优化后进行检测。

技术领域

本发明涉及一种利用离子交换固相萃取富集，高效液相手性色谱分离，质谱检测食品，饮料，动植物，及其它含有氨基酸试样中20种游离D型氨基酸的富集检测方法。

背景技术

氨基酸是一类在食品及饮料中常见的物质，是重要的感官品质和营养成分，其含量、种类及比例是评价食品营养价值优劣的主要指标之一。氨基酸本身具有鲜味，同时在食品中还可以补充和增强原有的风味。在一些果汁饮料中，氨基酸参与果实其他品质特征成分和风味物质的合成。并且在酿造过程中，氨基酸的含量水平不仅体现在发酵的工艺特征上，而且与食物的品种，产地密切相关。同时含有氨基酸的运动饮料被人体饮用后，氨基酸会直接被血液输送到身体的各个器官，供给肌肉的需要。因此食品及饮料中氨基酸的组分和准确定性定量分析可以为人们合理膳食，营养搭配提供指导，具有重要意义。

氨基酸是生物体内最重要的活性分子，除甘氨酸外，所有的α氨基酸分子中的α碳原子都为不对称原子，均有对映异构体。长期以来，L-氨基酸被认为是生物体内唯一的氨基酸形式。近年来，D-氨基酸已被发现存在于人和动物体内，并已证明具有一些重要的生理功能，人们也渐渐认识到D型氨基酸在生物体中也起着很重要的作用。在医学制药上，如果将D-氨基酸加入氨基酸类抗生素中，则会大大降低药物被细菌降解的几率，服用后难以产生抗药性。此外，L型氨基酸少数几种具有鲜味，而D型氨基酸普遍具有甜味，其中D-色氨酸的甜度约为蔗糖的35倍。因此单独研究单一氨基酸构型在很多领域具有重大意义。这样开发一种快速，简单的分离检测D型氨基酸的方法就显得尤为重要。

由于在分析手段上的限制，食品及饮料中氨基酸对映异构体的存在鲜有报道。目前氨基酸的分析方法多为衍生法，柱前衍生步骤较繁琐，衍生副产物产生分析干扰，而柱后衍生所需附加装置加工昂贵，分析时间长。氨基酸多数没有显色基团，用紫外检测灵敏度低。D-氨基酸在试样中通常是痕量成分，难以用常规方法检测。此外，非衍生法同时拆分多种氨基酸对映异构体具有较大挑战性。因此本发明提供一种离子交换固相萃取富集，高效液相手性色谱分离，质谱检测的方法，可达到对试样中D-氨基酸定性和定量分析，样品无需进行衍生化。本方法可被应用于食品、饮料、动植物、以及其它需要分析D型氨基酸的试样中。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明旨在提供一种食品、饮料、配料及动植物中D型氨基酸的检测方法，前处理简单，检测方法简单，易于操作，定性准确，定量精确，且重复性好，能够实现20种D型氨基酸的同时检测。

本发明采用的技术方案如下：

一种游离D型氨基酸的富集检测方法，其特点在于包括以下步骤：

S1、待测样品制备；

S2、待测样品中氨基酸的富集；

S3、待测样品中氨基酸对映异构体的拆分；

S4、待测样品中氨基酸的鉴定与定量；

进一步，所述步骤S3、S4中D-氨基酸和L-氨基酸的拆分与检测采用手性液相-质谱分析方法，分析条件如下：

液相条件：

手性色谱柱：Astec CHIROBIOTIC T(4.6mmi.d.,250mm5μm)；

流动相：A：水(0.02％甲酸)B：甲醇(0.02％甲酸)；