[发明专利]三型金属蛋白酶（TIMP-3）组织抑制剂的变体、组合物和方法

权利要求书

1.一种分离TIMP-3突变蛋白，所述突变蛋白具有在氨基酸序列方面与SEQ ID NO：2中所示的TIMP-3的成熟区有至少95％同一性的成熟区，具有至少一个突变，所述突变选自由以下组成的组：K45E；K45N；K45S；V47T；K49N；K49E；K49S；K50N；L51T；L51N；V52T；K53T；P56N；F57N；G58T；T63E；T63N；K65T；K65N；M67T；K68S；T74E；K75N；P77T；H78D；H78E；H78N；Q80E；Q80T；K94N；E96T；E96N；V97N；N98T；K99T；D110N；K112T；Q126N；K133S；R138T；R138N；H140T；T158N；K160T；T166N；M168T；G173T；H181N；A183T；R186N；R186Q、R186E、K188T；K188Q、K188E、P201N；K203T；I205F、I205Y、A208G、A208V和A208Y。

2.一种分离TIMP-3突变蛋白，其具有在氨基酸序列方面与SEQ ID NO：2中所示的TIMP-3的成熟区有至少95％同一性的成熟区，具有突变F57N和至少一个其他突变，其中所述突变是在TIMP-3的一个或多个K残基处的置换。

3.如权利要求2所述的TIMP-3突变蛋白，其中所述其他突变向所述氨基酸序列中引入N-连接的糖基化位点。

4.一种分离TIMP-3突变蛋白，其具有在氨基酸序列方面与SEQ ID NO：2中所示的TIMP-3的成熟区有至少90％同一性的成熟区，其中所述突变蛋白具有至少一个向所述氨基酸序列中引入至少一个N-连接的糖基化位点的突变。

5.如权利要求4所述的TIMP-3突变蛋白，其中引入两个、三个、四个、五个或六个N-连接的糖基化位点。

6.如权利要求3所述的TIMP-3突变蛋白，其中所述N-连接的糖基化位点是在选自由以下组成的组的所述TIMP-3氨基酸序列的区域引入的：包含氨基酸48-54的区域；包含氨基酸93-100的区域；包含氨基酸121-125的区域；包含氨基酸143-152的区域；氨基酸156-164；包含氨基酸183-191的区域；及其组合。

7.如权利要求6所述的TIMP-3突变蛋白，其中引入两个、三个、四个或五个或六个(或更多)N-连接的糖基化位点。

8.一种分离TIMP-3突变蛋白，其具有在氨基酸序列方面与SEQ ID NO：2中所示的TIMP-3的成熟区有至少95％同一性的成熟区，其中所述突变蛋白具有至少一个选自由以下组成的组的突变：

(a)TIMP-3表面暴露的带正电膜片中的一个或多个突变，其导致模拟TIMP-1、TIMP-2或TIMP-4带电表面的TIMP-3带电膜片的特征的改变；

(b)一个或多个降低对蛋白水解裂解敏感度的突变；

(c)一个或多个导致TIMP-3突变蛋白与清除受体LRP-1相互作用降低的突变；

(d)一个或多个导致TIMP-3突变蛋白肝素或胞外基质组分的相互作用降低的突变；

(e)向天然TIMP-3序列添加一个或多个半胱氨酰残基；

(f)改善的药动学和/或药效学性质；

(g)引入至少一个N-连接的糖基化位点的一个或多个突变；和

(h)(a)-(g)中所示的突变的组合。