[发明专利]一种猪肺炎支原体培养基及制备方法

说明书

本发明属于微生物工程技术领域，公开了一种猪肺炎支原体培养基及制备方法，猪肺炎支原体培养基的制备方法包括：量取灭菌1％水解乳蛋白Hank's液400mL、无菌DMEM溶液400mL、无菌灭活猪血清200mL、灭菌酵母浸液10mL、双抗溶液50mL，用灭菌的3.5％NaHCO₃调pH至7.6，备用。本发明培养基配制操作简单、无需使用难以买到的醋酸铊溶液，醋酸铊溶液为危险化学品，购买流程复杂，而且本发明无需对配好的培养基过滤除菌，试验证明新培养基优于其他几种常用的猪肺炎支原体培养基。

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，尤其涉及一种猪肺炎支原体培养基及制备方法。

背景技术

目前，猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine，Mps又称猪气喘病)的主要病原，也是猪呼吸道疾病综合症的一种重要的原发性病原。Mhp主要感染猪呼吸道，本身致病力不强，临床症状主要以咳嗽和气喘为主，病变特征主要是肺的尖叶、心叶、中间叶和隔叶前缘呈“肉样”或“虾肉样”实变。Mhp感染机体后主要与呼吸道内壁的纤毛黏附，引起纤毛细胞病变和凋亡，导致纤毛断裂和脱落，引起机体发病，并且会严重影响猪的生长发育和饲料转化率，或者破坏粘膜-纤毛屏障，容易继发其他致病菌的感染(特别是对青年猪)，提高致死率，因而给养猪业造成巨大的经济损失。目前猪支原体肺炎的主要防治措施是疫苗和药物，但有效的药物较缺乏，因此，进行该病的疫苗研制将为本病的预防和控制具有重要的意义。

综上所述，现有技术存在的问题是：(1)现有技术培养基配制操作繁琐，应用的醋酸铊溶液是危险化学品，购买流程十分复杂，配制好的培养基需全部过滤除菌，增加了制备的难度，而且获得的培养基培养效果不理想。

(2)现有的培养基，配制过程复杂，本发明培养基取材容易，配制过程简单，培养效果优于其他几种培养基，解决了猪肺炎支原体难以培养的问题。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种猪肺炎支原体培养基及制备方法。

本发明是这样实现的，一种猪肺炎支原体液体培养基的制备方法包括：灭菌1％水解乳蛋白Hank's液400mL、无菌DMEM溶液400mL、无菌灭活猪血清200mL、灭菌酵母浸液10mL、双抗溶液50mL，用灭菌的3.5％NaHCO₃调pH至7.6。

进一步，Hank’s液的配制，具体包括：

(1)甲液的配制1L：氯化钠160g、氯化钾8g、硫酸镁2g、氯化镁2g、加蒸馏水至800mL溶解后加入氯化钙2.8g，补足蒸馏水至1L，并加2mL氯仿作为防腐剂，于4℃冰箱保存；

(2)乙液的配制1L：磷酸氢二钠3.04g、磷酸二氢钾1.2g、葡萄糖20g，将上述成分溶于800mL蒸馏水中，再加入100mL 0.4％酚红溶液；加蒸馏水至1000mL，并加2mL氯仿防腐，于4℃冰箱保存；

(3)取甲液1份，乙液1份、蒸馏水18份，121℃灭菌15min后，置于4℃冰箱保存备用；使用时用3.5％的碳酸氢钠溶液，将pH值调至7.2～7.6。

进一步，酵母浸液的制备包括：

酵母粉25g加100mL双蒸馏水，煮沸30min，4000r/min离心15分钟，吸取上清于玻璃瓶中，121℃高压灭菌15min。

进一步，1％水解乳蛋白的配制包括：

称取1g水解乳蛋白粉溶于100mLHank’s液，装玻璃瓶内，121℃高压灭菌15min，4℃冰箱保存备用。