[发明专利]一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法

说明书

本发明公开了一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法，包括如下步骤：准备通用型包被抗体缓冲液，孵育过夜；加入封闭缓冲液孵育并加入两套相同的一定梯度待测物，再将含有猴血清和不含猴血清的检测抗体工作液分别加入待测物中；显色并终止，在酶标仪处理后对比每组数据的背景值，灵敏度。本方法可以克服猴血清或者猴血浆中通用型方法一般的背景值会相对高，进而影响方法的灵敏度，不利于低剂量组动物暴露量检测的问题。

技术领域

本发明涉及生物分析领域，特别针对降低背景信号值以优化方法和方法灵敏度的作用，具体涉及一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法。

背景技术

大分子生物分析方法中灵敏度的考察是一项重要的指标，也是目前FDA,NMPA,OECD的建议对生物分析方法必须要验证的参数。FDA中描述LLOQ定义了方法的灵敏度，应该在方法开发期间确定。并且开发和验证该灵敏度，使其能够满足预期生物样本检测的要求。NMPA也描述灵敏度是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的准确度和精密度。灵敏度是标准曲线的最低点，应适用于预期的浓度和试验目的。而背景值如果很高，一般最直观的显示出此方法受基质的影响很大。也会侧面的影响方法中灵敏度的准确度和精密度。

降低高背景信号值的方式有很多，例如增大最小稀释倍数、改变封闭液、更换试剂甚至更换方法。但是增大最小稀释倍数减少基质含量以达到降低基质的干扰作用的缺点是同时可能会造成灵敏度的下降，改变封闭液可能会增大方法成本，更换试剂和方法的方式可能会使通用型的方法因药物不同而不适用。

为了使通用性方法可以为每个药物提供检测途径，掌握有效降低背景值且优化灵敏度的解决方式，才能保证通用型生物分析方法开发的有效性，保证后续的方法验证和样品分析的有效进行。

同时临床前药效动力学中对全药的检测也具有非常重要的意义。对不同的药物进行检测，使用已建立的通用型方法，具有不仅可以节约时间，还可以节约试剂成本的优点。但是目前的通用型方法会普遍遇到的问题是背景值高，灵敏度相对较低。

目前使用通用型方法会大大的降低一些临床前样品分析的时间成本和试剂成本，通用型方法的试剂选择环节尤为重要。且猴血清或者猴血浆中通用型方法一般的背景值会相对高，进而影响方法的灵敏度，不利于低剂量组动物暴露量的检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法，添加猴血清可以有效改善通用型生物分析方法的背景值和优化灵敏度，且无论包被抗体是一般的抗人Fc抗体还是抗特定片段的多克隆抗体，本方法均是有效的。本方法可以克服猴血清或者猴血浆中通用型方法一般的背景值会相对高，进而影响方法的灵敏度，不利于低剂量组动物暴露量的检测的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法。

作为本发明优选的技术方案，该方法包括如下步骤：

I.将通用型包被抗体缓冲液加至高吸附板中，孵育过夜；用洗液洗板后加入封闭缓冲液，室温孵育；再用洗液洗板后加入两套相同的待测物，室温孵育；

II.分别配制含有猴血清的检测抗体工作液和不含猴血清的检测抗体工作液并分别加入待测物中室温孵育；

III.显色并终止，在酶标仪处理后对比每组数据的背景值、灵敏度。

作为本发明优选的技术方案，步骤I中所述通用型包被抗体缓冲液的制备方法为：分别准备抗人Fc段的多克隆抗体和抗人CH2段的多克隆抗体，使用碳酸盐缓冲液配制包被抗体缓冲液。