[发明专利]一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法

权利要求书

1.一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法，其特征在于，包含以下步骤：

I.将通用型包被抗体缓冲液加至高吸附板中，孵育过夜；用洗液洗板后加入封闭缓冲液，室温孵育；再用洗液洗板后加入两套相同的待测物，室温孵育；

II.分别配制含有猴血清的检测抗体工作液和不含猴血清的检测抗体工作液并分别加入待测物中室温孵育；

III.显色并终止，在酶标仪处理后对比每组数据的背景值、灵敏度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I中所述通用型包被抗体缓冲液的制备方法为：分别准备抗人Fc段的多克隆抗体和抗人CH2段的多克隆抗体，使用碳酸盐缓冲液配制包被抗体缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I中所述洗液为含有0.05%~0.1%Tween的PBS；所述封闭缓冲液为3%~5% BSA；所述待测物为在猴血清中配制的含有梯度为5000-10ng/mL的药物，并使用1%BSA进行50倍的预稀释。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I中，所述高吸附板为96孔板，每孔加入100微升通用型包被抗体缓冲液，在2~8℃孵育过夜。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I中，所述高吸附板为96孔板，用洗液洗板3-5次后拍干，每孔加入300微升封闭缓冲液，室温下孵育1~3小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I中，所述高吸附板为96孔板，用洗液洗板3-5次后拍干，每孔加入100微升待测物，400-600转每秒室温孵育2小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤II中，所述含有猴血清的检测抗体工作液的配制方法为：1：20000倍稀释在含5% 猴血清的1%BSA中；所述不含有猴血清的检测抗体工作液的配制方法为：1：20000倍稀释在1%BSA中。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤II中在对应的孔中每孔加入100微升检测抗体工作液，400-600转每秒室温孵育1小时。

9.根据权利要求1或7或8所述的方法，其特征在于，在步骤I和步骤II之间增加如下步骤：用洗液洗板3-5次后拍干。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述洗液为含有0.05%~0.1% Tween的PBS洗液，每孔加入300微升洗液，洗板3-5次后拍干。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤III中，所述显色并终止具体为：在对应的孔中每孔加入100微升TMB室温下避光显色，在370nm波长下酶标仪读最大浓度值为1.4-1.6时，每孔加入100微升2N H2SO4终止。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤III中，所述在酶标仪处理后对比每组数据的背景值、灵敏度，具体为：在450nm波长下读取最终数据，在酶标仪上按照试验条件设置模板处理拟合曲线处理数据，并比较每组数据的背景值、灵敏度。

13.根据权利要求1或10或11所述的方法，其特征在于，在步骤II和步骤III之间增加如下步骤：用洗液洗板3-5次后拍干。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述洗液为含有0.05%~0.1%Tween的PBS洗液，每孔加入300微升洗液，洗板3-5次后拍干。