[发明专利]一种基于组织芯片的蛋白-蛋白相关性的分析方法及应用

说明书

本发明提供了一种基于组织芯片的蛋白‑蛋白相关性的分析方法及应用。所述的分析方法通过先对组织芯片进行全局性预览，分级进行观察，在连号的组织芯片上同一个组织点相同视野中对比待研究的蛋白的表达情况及分析。本发明分析方法将待分析的蛋白的表达在相同组织的几乎相同位置进行相关性比较分析，特异性和精细性得到了显著的提高，更加贴近真实表达情况，由此更好地呈现和反映样品如肿瘤组织中蛋白‑蛋白表达的相关性，更好地辅助肿瘤基础研究，对于蛋白‑蛋白表达相关性研究、疾病科学研究等均具有重要意义和应用价值。

技术领域

本发明属于生物检测方法领域，特别涉及一种基于组织芯片的蛋白-蛋白相关性的分析方法及应用。

背景技术

蛋白-蛋白表达相关性的分析与鉴定对于肿瘤基础研究中确定两个蛋白的表达关系至关重要，尤其是利用临床肿瘤组织进行的分析更为关键。然而，现有的分析方法难以满足特异性和精细性。目前的分析方法一般将蛋白在肿瘤组织中的表达水平分为三个或四个等级，有些组织中这个蛋白的表达水平并不完全属于三或四个等级中的一个，但最终也会勉强归到一个近似的等级，出现分级不够精细、不够特异的问题。另一方面，由于同一个组织点不同视野蛋白的表达可能有明显差异，现有的分析方法会导致一些蛋白评分偏差。

因此，研究开发特异性和精细性更好的方法，使分析与鉴定更加贴近真实表达情况，对于蛋白-蛋白表达相关性研究、疾病科学研究等均具有重要意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于组织芯片的蛋白-蛋白相关性的分析方法；本发明将待分析的不同蛋白在相同的视野下进行评分比较。

本发明的又一目的在于提供所述的基于组织芯片的蛋白-蛋白相关性的分析方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种基于组织芯片的蛋白-蛋白相关性的分析方法，包括如下步骤：

(1)在组织芯片上对其中一种待分析蛋白进行染色；

(2)通过完整的全局性预览该组织芯片中该种待分析蛋白的表达水平，将所述的待分析蛋白的表达强度和表达百分比分别分为五个等级，例如从1到5，或者0到4；

(3)在特定视野下，将该种待分析蛋白的表达强度的分值乘以该种待分析蛋白的表达百分比的分值，得出该种待分析蛋白表达总分，也即染色强度；

(4)在与步骤(1)所述的组织芯片连号的其他组织芯片上的相同特定视野中，依次对其他待分析蛋白进行染色强度的观察分析，重复步骤(1)～(3)；一般来说，一个组织芯片只对一种待分析蛋白进行染色分析，比如组织芯片I染A蛋白，组织芯片Ⅱ染B蛋白；

(5)将所得到的不同待分析蛋白的表达总分利用统计学中的相关性分析方法进行相关性分析。

步骤(1)中所述的组织芯片优选为肿瘤组织芯片。

步骤(1)中所述的染色的方法可以是常规的免疫组化染色方法或组织免疫荧光染色方法等等。

步骤(2)中所述的表达百分比的等级优选依次为0～20％，21～40％，41～60％，61～80％，80％以上这五个等级。

步骤(2)中所述的表达强度的等级优选依次为：完全没表达为0；弱为1；中等为2；较强为3；很强为4。

步骤(2)所述的全局性预览优选在低倍镜下进行预览，所述的低倍镜的放大倍数可以是5倍左右。

步骤(3)中所述的特定视野可以选择染色强度较为接近的多个，例如三个，可以均是表达相对高的，可以均是表达相对适中的，也可以是表达相对低的。

步骤(5)中所述的相关性分析方法根据数据类型、样本量选择Spearman或者Pearson相关系数分析。