[发明专利]一种高油抗逆牡丹选育方法

说明书

本发明公开了一种高油抗逆牡丹选育方法，该方法包括初选、复选、丰产性筛选以及高油、抗性基因遗传稳定性筛选，大大缩短选育周期，精准提升育种效率。尤其是基于启动子环境胁迫响应功能元件序列的筛选方法更真实、精准和可靠；并且本发明通过先克隆抗逆基因启动子再克隆功能元件特征序列避免了由基因组DNA直接克隆所带来的假阳性风险。

技术领域

本发明涉及木本植物培育领域，具体而言，涉及一种高油抗逆牡丹选 育方法。

背景技术

我国油质油料对外依存度高达70％，而粮食生产必须保护18亿亩基本 农田，发展不与粮争地的木本油料成为唯一选择。核桃、油茶、油用牡丹 等成为国家战略资源。油用牡丹抗逆性强适应性广，适合广袤大地露地和 林下栽培，具有广阔发展前景。

牡丹属于芍药科(Paeoniaceae)芍药属(PaeoniaL.)牡丹组(Sect. Moutan DC.)落叶灌木，共有8个种(洪德元,潘开玉.芍药属牡丹组的 分类历史和分类处理[J].植物分类学报,1999(04):48-65)。其中，革 质花盘亚组6种：①牡丹(P.suffruticosa)、②矮牡丹(P.jishanensis)、 ③卵叶牡丹(P.qiui)、④凤丹(杨山牡丹，P.ostii)、⑤紫斑牡丹(P.rockii)、⑥四川牡丹(P.decomposita)。肉质花盘亚组2种： ⑦滇牡丹(P.delavayi)、⑧大花黄牡丹(P.ludlowii)，全部原产我 国。园艺栽培品种牡丹(P.suffruticosa)已多达1000多个，栽培中心 为河南洛阳和山东菏泽；抗性弱，保护地栽培。紫斑牡丹(P.rockii)的花瓣内侧基部有色斑，品种500多个，抗性强，主要在甘肃兰州、临洮、 临夏等地栽培。

牡丹历来作为药用和观赏名花。王华芳团队1996年开始研究杨山牡丹 ‘凤丹’生理与生物化学基础，1998年发现‘凤丹’胚乳富含脂肪，之后 牡丹籽油成分的测试分析不时有报道，但所涉及的品种、数据等不尽相同， 即使同一种牡丹，测定的数据也不尽一致，这些研究定性地证实了油用牡 丹的存在，但是同时也可以看出仅采用测定脂肪含量的方法选育高油品种 结果并不稳定也不可靠。

从芍药属牡丹组野生种(未人工改良)资源中选育高油的且具有生产 价值的油用牡丹，快速选育、快速应用，可助力解决生产亟需的优质油用 牡丹材料，助力生态文明建设和强农兴农籽油工业体系产业链。牡丹种子 播种形成的实生苗，必须经过3年以上的童期才能开花。且油用牡丹概念 的提出和生产应用是最近5年左右的事情，“待容器苗开花结实，选择观 赏性强，结实率高的单株嫁接繁殖，然后在优良单株之间继续杂交，优中 选优”至少需要10年左右时间，无法应用于牡丹的快速选育。近年来， 筛选优质林木的方法在宏观传统方法基础上融入了微观手段，林木生理生 化和分子片段分析，如同工酶、染色体组分析法精度和准确性可靠性难以 满足选育油用牡丹需要。常规DNA序列分析法，如RFLP、RAPD、AFLP、SSR、 SNP等从DNA单分子到多聚分子片段(DNA碎片)，用于生物多样性遗传 位点多态性分析，也未能用于精准选育高油抗逆牡丹的生产需要。目前， 还未见到选育天然的或人工改良的油用牡丹的油用资源的有效选育技术。

发明内容

本发明提供了一种高油抗逆牡丹选育方法，包括如下步骤(1)-(2) 的任一项或两项：

(1)高油基因遗传稳定性筛选

以序列表中SEQ ID No.1-2、3-4、5-6、7-8和/或9-10所示的核苷 酸序列为引物对牡丹ABI、WRI、SAD、FAD2和/或FAD3基因进行实时荧光 定量RT-qPCR，检测表达量。

具体的，a.提取牡丹籽胚乳组织RNA，反转录获得cDNA序列。