[发明专利]一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb及其应用

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb及其应用。本发明提出一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb，所述抗人CD47单克隆抗体7G4mAb轻链可变区氨基酸序列如SEQ.ID.NO1所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ.ID.NO2所示。本发明所制备的抗体能识别肿瘤细胞表面CD47，包括但不限于Hela细胞、SiHa细胞、MDA‑MB‑231细胞、A549细胞、K562细胞、SBC‑5细胞，识别表面CD47后与肿瘤细胞发生结合，且与红细胞的结合率低于1%。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb及其应用。

背景技术

CD47是一种跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族。CD47具有一种“别吃我”信号，可以与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α (SIRPα)结合，从而抑制巨噬细胞对靶细胞的吞噬清除作用。Oldenborg等在研究体内红细胞更替的过程中发现，年轻红细胞表面高水平表达CD47蛋白保护其不被吞噬；而衰老的红细胞表面CD47表达下调，则被巨噬细胞吞噬清除。因此CD47是机体内年轻、衰老细胞更替的重要调节分子。然而CD47的这种“don't eat me”保护效应被肿瘤细胞所利用，逃避免疫系统清除。研究显示，CD47在多种类型的肿瘤细胞表面高表达，与患者的病理分级、转移和不良预后相关。CD47近几年已成为炙手可热的肿瘤治疗靶点。体内外实验表明，通过封闭肿瘤细胞表面CD47分子，可以阻断CD47SIRPα信号通路，促进巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。由于红细胞上有高表达的CD47分子，更容易与抗CD47抗体药物结合，导致巨噬细胞清除红细胞，诱发贫血症状，以及引起红细胞凝集等不良反应，引起药物毒性。

免疫疗法近些年成为肿瘤治疗的明星，多个免疫检查点治疗药物（抗PD1抗体、抗PDL1抗体）表现出较好的临床疗效。因此急需开发一种对肿瘤细胞具有特异性结合能力，且与红细胞结合率低于1%的抗CD47抗体。

发明内容

本发明提供一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb(以下简称7G4mAb)，该单克隆抗体7G4mAb可以结合多种肿瘤细胞，而且与红细胞结合率较低，可以为肿瘤治疗的抗体开发提供支持。

本发明所述一种抗人CD47单克隆抗体7G4mAb，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ.ID.NO1所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ.ID.NO2所示。

优选地，该抗体轻链可变区的核苷酸序列如SEQ.ID.NO3所示，重链可变区核苷酸序列如SEQ.ID.NO4所示。

进一步地，所述抗人CD47单克隆抗体7G4mAb可结合的肿瘤细胞包括但不限于Hela细胞或SiHa细胞或MDA-MB-231细胞或A549细胞或K562细胞或SBC-5细胞。

更进一步地，所述抗人CD47单克隆抗体7G4mAb与人体红细胞的结合率低于1%。

本发明提出一种用于构建基因工程抗体的应用。

特别提出一种用于抗肿瘤药物的单链抗体的应用。

或者特别提出一种用于抗肿瘤药物的嵌合抗体的应用。

本发明提出一种用于抗肿瘤药物的应用，所述肿瘤包括宫颈癌、肺癌、乳腺癌。

本发明提出一种用于肿瘤诊断、治疗指导、预后判断或复发监测试剂盒的应用。

优选地，所述试剂盒包含特异性检测CD47表达水平的试剂，该特异性检测CD47表达水平的试剂是特异性识别CD47抗原的抗体。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明所制备的抗体能有效识别肿瘤细胞表面CD47并与之发生结合，而与红细胞结合率小于1%，有效地避免了巨噬细胞清除红细胞，诱发贫血症状，及引红细胞凝集等不良反应，降低副作用。

附图说明