[发明专利]糖化血红蛋白检测试剂及胶乳微球与多聚赖氨酸偶联方法

说明书

本发明公开了一种糖化血红蛋白检测试剂，其包括R1试剂、R2试剂和R3试剂，R2试剂中包括一抗和二抗，一抗为鼠抗人HbA1c单克隆抗体，二抗为羊抗鼠IgG多克隆抗体，R3试剂中包括溶血剂，R1为聚苯乙烯胶乳试剂，R1试剂的胶乳微球与多聚赖氨酸偶联，通过多聚赖氨酸与胶乳微球的偶联使胶乳微球表面与糖化血红蛋白结合吸附的位置增多，提高结合的效率。本发明的糖化血红蛋白检测试剂，在R1试剂的胶乳微球上偶联了多聚赖氨酸，通过多聚赖氨酸与胶乳微球的偶联使胶乳微球表面与糖化血红蛋白结合吸附的位置增多，能提高胶乳微球表面与糖化血红蛋白结合的效率，使糖化血红蛋白检测试剂的检测灵敏度明显提升，也有利于缩短反应检测时间，提高检测的效率。

技术领域

本发明涉及一种生化分析技术领域，尤其涉及一种糖化血红蛋白检测试剂及胶乳微球与多聚赖氨酸偶联方法。

背景技术

目前临床上使用较为广泛的糖化血红蛋白的检测方法主要为高效液相色谱法、亲和层析法、电泳法等，这些检测方法操作复杂、耗时，且需要特殊的仪器，成本较高，市场上也存在其它检测方法，但是普遍存在测定准确度低的缺陷。

胶乳颗粒增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测技术。具体原理是在高分子胶乳微球的表面交联或物理吸附抗体，当交联有抗体的微球与糖化血红蛋白HbA1c结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变反应液的散光性能和透光性能。

而目前市售的胶乳比浊法试剂盒，普遍采用3种试剂(R1、R2和R3)，现有技术中，R1试剂普遍为聚苯乙烯胶乳微球试剂，通过物理吸附作用来结合糖化血红蛋白HbA1c，结合效率低，导致检测的灵敏度低，因而，需要对其进行改进。

发明内容

本发明的目的在于针对背景技术中所述的现有的糖化血红蛋白检测试剂等问题，提供一种能够解决前述问题的糖化血红蛋白检测试剂。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：糖化血红蛋白检测试剂，其特点是：其包括R1试剂、R2试剂和R3试剂，R2试剂中包括一抗和二抗，一抗为鼠抗人HbA1c单克隆抗体，二抗为羊抗鼠IgG多克隆抗体，R3试剂中包括溶血剂，R1试剂为聚苯乙烯胶乳微球试剂，R1试剂的胶乳微球与多聚赖氨酸偶联，通过多聚赖氨酸与胶乳微球的偶联使胶乳微球表面与糖化血红蛋白结合吸附的位置增多，提高结合的效率。

进一步的方案是，所述的R1试剂中，聚苯乙烯胶乳微球的粒径为50nm-500nm，浓度为0.05％-0.5％(质量/体积比)，多聚赖氨酸的浓度为0.1g/L-5g/L，分子量为1000-30000。

进一步的方案是，所述的R2试剂中，鼠抗人HbA1c单克隆抗体的浓度为50mg/L-100mg/L,羊抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为10mg/L-20mg/L。

进一步的方案是，所述的R3试剂中，溶血剂为曲拉通X-100，其浓度为0.1％-1％(体积/体积比)。

本发明的另一个发明目的是提供胶乳微球与多聚赖氨酸偶联方法，其包括以下步骤：

1)量取一定量的胶乳微球，置于烧杯中，并进行磁力搅拌；

2)缓慢加入一定量的MES BUFFER；

3)分别称量一定量的EDAC、Sulfo-NHS和多聚赖氨酸，并加入烧杯中，在室温下，磁力搅拌均匀；

4)将步骤3中搅拌均匀的溶液从烧杯转移至离心管中，用去离子水吹洗烧杯，一并转移至离心管中；

5)配平后离心，离心转速设置为13000-18000rpm,温度设置为8℃，离心60分钟；

6)离心结束后，倒掉上清液，加入去离子水，充分重悬并超声胶乳微球与多聚赖氨酸的偶联粒子，完成胶乳微球与多聚赖氨酸偶联。