[发明专利]一种用于DNA分离的磁珠分选液及其制备方法在审
| 申请号： | 202010042158.0 | 申请日： | 2020-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN111197043A | 公开（公告）日： | 2020-05-26 |
| 发明（设计）人： | 许明炎;张晓妮;沈广强 | 申请（专利权）人： | 深圳海普洛斯医学检验实验室;深圳市海普洛斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 张海平;彭愿洁 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 dna 分离 分选 及其 制备 方法 | ||
1.一种用于DNA分离的磁珠分选液，其特征在于，以51ml体积的所述磁珠分选液计，包含1ml GE磁珠、5-10g PEG、12.5-50mg吐温20、50-125mmol NaCl、0.25-1mmol Tris、0.025-0.1mmol EDTA和0.085-0.34mmol HCl。
2.根据权利要求1所述的磁珠分选液，其特征在于，所述PEG为PEG4000、PEG6000或PEG8000。
3.一种制备根据权利要求1或2所述的磁珠分选液的制备方法，其特征在于，所述制备方法以GE磁珠为原料，包括以下步骤：
(1)GE磁珠清洗：用磁珠清洗液清洗所述GE磁珠，其中所述磁珠清洗液包含0.05体积％的吐温20和1mM Tris-HCl；
(2)GE磁珠重悬：将1ml经清洗的所述GE磁珠重悬在29.75ml预结合缓冲液中，然后加入20ml的25-50％PEG储液和0.25ml的5-20％吐温20储液，混合均匀，得到所述磁珠分选液，其中所述预结合缓冲液由25ml的2-5M NaCl储液、0.5ml的0.5-2M Tris储液、0.5ml的0.05-0.2M EDTA储液、0.17ml的0.5-2N HCl储液和3.58ml的水配制而成。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述GE磁珠清洗包括使所述GE磁珠在室温下平衡一段时间，震荡混匀，磁力分离所述GE磁珠，弃上清；然后加入所述磁珠清洗液清洗所述GE磁珠。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述平衡一段时间为平衡30min。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述加入所述磁珠清洗液清洗所述GE磁珠包括第一次清洗和第二次清洗，其中所述第一次清洗包括加入所述磁珠清洗液，震荡混匀，磁力分离所述GE磁珠，弃上清，所述第二次清洗包括再次加入所述磁珠清洗液，震荡混匀，磁力分离所述GE磁珠，弃上清。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述第一次清洗和所述第二次清洗中，所述GE磁珠清洗液与所述GE磁珠的体积比为1:1。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述GE磁珠重悬包括向清洗后的所述GE磁珠加入1ml的所述预结合缓冲液中，震荡混匀，使所述GE磁珠重悬，短暂离心；将重悬的所述GE磁珠全部加入到28.75ml的所述预结合缓冲液中，震荡混匀；再加入所述PEG储液和所述吐温20储液，震荡混匀，得到所述DNA分离磁珠。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述水为无核酸酶的水。
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