[发明专利]一种脐血间充质干细胞的分离培养方法在审
| 申请号： | 202010026904.7 | 申请日： | 2020-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN111172104A | 公开（公告）日： | 2020-05-19 |
| 发明（设计）人： | 何婷婷;聂苏秦;肖轩;戴博;朱艳丽 | 申请（专利权）人： | 陕西九州细胞基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 吴甘棠 |
| 地址： | 710000 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脐血间充质 干细胞 分离 培养 方法 | ||
1.一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
对脐血进行离心处理，取上层得到血浆，下层为细胞；
对所述血浆进行灭活处理后，再进行离心处理，取上层得到自体血清，备用；
将所述下层细胞与生理盐水混合后，再置于淋巴细胞分离液中进行至少一次的离心处理，弃上清，得到脐血单个核细胞；
用所述自体血清包被培养皿，得到自体血清包被的培养皿，备用；
用无血清培养基重悬所述脐血间单个核细胞，并置于所述自体血清包被的培养皿中进行原代培养，得到原代间充质干细胞；
往所述原代间充质干细胞添加细胞消化液进行细胞消化处理后，再进行传代培养。
2.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，灭活处理的温度为56℃。
3.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，生理盐水中氯化钠的质量百分比浓度为0.9％。
4.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，无血清培养基为添加有L-谷氨酰胺的Lonza无血清培养基。
5.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，细胞消化液为胰酶细胞消化液。
6.根据权利要求5所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，所述胰酶细胞消化液中胰酶的质量百分比浓度为0.125％。
7.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，原代培养的细胞接种密度为(1～2)×106cells/cm2。
8.根据权利要求1所述的一种脐血间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤中，传代培养的细胞接种密度为(0.5～1)×104cells/cm2。
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