[发明专利]一种新生儿血片中氨基酸及肉碱筛查预处理方法

说明书

本发明涉及一种新生儿血片中氨基酸及肉碱筛查预处理方法，预处理方法为将血液样品自然晾干制成干血斑，将干血斑放入96孔板过滤机中加入萃取液进行离心过滤，96孔板的内部放置聚四氟乙烯薄膜。聚四氟乙烯薄膜的孔径为0.22‑0.45μm。96孔板过滤机的转速为小于等于3000r/min。本发明的预处理方法不仅具有对干血斑的萃取液极好的通透性，而且过滤干净，基本没有杂质，峰型稳定，检测结果准确性好。

技术领域

本发明属于氨基酸肉碱检测领域，具体涉及一种新生儿血片中氨基酸及肉碱筛查预处理方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

遗传性代谢病(inborn error of metabolism，IEM)是一类涉及氨基酸、有机酸、脂肪酸、尿素循环、碳水化合物、类固醇等多种物质代谢的疾病。其种类繁多，是儿科临床的疑难杂症。虽然其单一病种患病率较低，但总体发病率较高，对人口素质、家庭乃至社会的发展构成了极大的威胁。

新生儿筛查是指在新生儿期通过对某些危害严重的遗传代谢缺陷、先天性疾病进行群体筛查，早期诊治，从而避免或减轻疾病的危害。LC-MS/MS技术的发展使得类似苯丙酮尿症这类遗传代谢疾病在发病前进行干预成为可能。即在新生儿出生后体内某些代谢产物出现异常，而尚未出现临床症状或者症状不明显时就早期明确诊断，并进行及时而有效的对症治疗，以避免患儿的重要脏器出现不可逆性损害，进而保障儿童正常的体格发育和智能发育。

串联质谱用于遗传代谢病的筛查诊断，主要通过数十种小分子的分析，筛查出包括氨基酸病、有机酸代谢紊乱和脂肪酸氧化缺陷在内的多种遗传代谢病，大大提高了筛查效率，实现了“一种实验检测一种疾病”到“一种实验检测多种疾病”的转变。基于串联质谱平台研发的新生儿遗传代谢病筛查试剂盒主要是将新生儿干血滤纸片中的氨基酸、有机酸、酰基肉碱萃取出来进行质谱分析。

新生儿遗传代谢病筛查试剂盒(即非衍生化法多种氨基酸、肉碱测定试剂盒)的样品前处理简单易操作，通过打孔器在干血滤纸片，然后加入萃取液，萃取后进行分析，萃取过程发生的装置即为过滤装置，过滤装置一般以针头式过滤器为主。针头式过滤装置不能批量处理样本，处理时间长，且所需样本量大，处理过程样本损失量大，所以不适合新生儿筛查项目。在样本正常提取的前提下，随着进样数目增多，仪器的清洗频率增大，若不及时清洗，造成仪器故障的频率越大，影响使用及检测。大批量样本进样时，液相色谱仪的高压阀转子、进样针及管路容易堵塞，造成压力过高，无法进样，同时杂质也在质谱的喷针及锥孔处积累，造成采集信号越来越低，影响样本检测准确性。在实验中发现，连续进样1000针后液相色谱仪压力超过承受上限，个别物质质谱采集信号低于定量限。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种新生儿血片中氨基酸及肉碱筛查预处理方法。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种新生儿血片中氨基酸及肉碱筛查预处理方法，预处理方法为将血液样品自然晾干制成干血斑，将干血斑利用试剂盒进行提取，然后取上清液放入96孔板过滤板内利用96孔板离心机进行过滤，96孔板的内部放置聚四氟乙烯薄膜。

本发明的预处理方法对干血斑的检测稳定性强，可重复性好，相比于现有的干血斑whatman 903号纸预处理方法具有更好的检测效果，进样10000针不会发生堵塞现象。相比于其它预处理方法，具有更好的通透性和检测稳定性。

在一些实施例中，96孔板过滤机的转速为小于等于3000r/min。聚四氟乙烯薄膜配合96孔板离心机的转速能够保证液体通过聚四氟乙烯薄膜，满足液体较好的通透性。