[发明专利]敲除Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因的重组T细胞及其应用

说明书

本发明公开了敲除Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因的重组T细胞及其应用。本发明首先公开了重组T细胞，其不含Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因。本发明进一步公开了上述重组T细胞的制备方法及其在制备抗肿瘤的产品中的应用。本发明在CAR‑T、TCR‑T或其它形式的T细胞中敲除Rc3h1和/或Zc3h12a，可以避免任何与全身辐照或者细胞毒性药物相关的副作用，在不需要任何预处理的情况下使得回输的T细胞大量扩增并发挥抗肿瘤的作用，对患者进行细胞过继治疗，而且本发明需要的细胞数目显著降低，极大的增加CAR‑T以及其他细胞过继治疗的有效性，使用范围广，有效性和安全性高，具有潜在临床应用价值。

技术领域

本发明涉及免疫细胞技术领域。具体涉及敲除Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因的重组T细胞及其应用。

背景技术

细胞过继治疗(Adoptive cell transfer therapy)包括嵌合抗原受体(CAR)-T和T细胞受体(TCR)-T等，在肿瘤的免疫治疗中具有非常显著的效果，尤其是对于淋巴细胞白血病。

目前所有的CAR-T治疗都需要对患者进行预处理，包括全身辐照或者细胞毒性药物，用于去除患者自身的免疫细胞，以便为输入的T细胞提供扩增的空间。临床试验和动物实验结果都清晰的显示，CAR-T在没有经过预处理(全身辐照或者细胞毒性药物)的患者和动物无法发挥治疗效果，因为回输的CAR-T不会扩增并发挥作用。全身辐照和细胞毒性药物对患者有很大副作用，包括骨髓抑制、免疫缺陷、易发感染、脱发、消化道症状、神经系统症状等。有很多患者因为无法承受这些副作用而不适用于CAT-T治疗，或者因副作用在治疗过程中死亡。因此，如何能够在不需要对患者进行副作用极大预处理的情况下进行有效的CAR-T治疗以及其它细胞过继治疗是一个难题。

Rc3h1和Zc3h12a是细胞中参与mRNA降解的两个蛋白质，目前尚无靶向这两个蛋白质进行疾病治疗的技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为如何在不需要对患者进行预处理的情况下有效进行肿瘤的免疫治疗。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种重组T细胞。

本发明重组T细胞为不含Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因的T细胞，或者Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因产物的生物学功能被抑制的T细胞。

所述Rc3h1基因在小鼠基因组中的基因ID为381305(2019年9月24日更新)；所述Rc3h1基因在人基因组中的基因ID为149041(2019年12月21日更新)；所述Zc3h12a基因在小鼠基因组中的基因ID为230738(2019年12月10日更新)；所述Zc3h12a基因在人基因组中的基因ID为80149(2019年12月21日更新)。

上述重组T细胞中，所述重组T细胞是将靶标T细胞的Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因敲除得到的重组T细胞。

上述重组T细胞中，所述靶标T细胞为CAR-T细胞或CD8 T细胞。

上述重组T细胞中，所述CAR-T细胞为CD19-CAR-T细胞。

本发明进一步提供了一种激活的重组T细胞。

本发明激活的重组T细胞，是将上述重组T细胞进行激活得到的。

上述重组T细胞的制备方法也在本发明的保护范围之内。

本发明重组T细胞的制备方法包括将靶标T细胞的Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因敲除，得到所述重组T细胞。

上述制备方法中，通过CRISPR-Cas9方法将靶标T细胞的Rc3h1基因和/或Zc3h12a基因敲除。