[发明专利]一种利用分光光度计快速测定烟草中葡萄糖含量的方法

说明书

本发明公开了一种利用分光光度计快速测定烟草中葡萄糖含量的方法。包括样品前处理、标准工作曲线绘制、样品溶液葡萄糖浓度推算、准确定量计算。本发明首次将分光光度计用于烟草及烟草制品中葡萄糖含量的快速准确定量，烟草样品中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将还原性的4‑氨基安替比林与酚偶联缩合成有紫外吸收的醌类化合物，用分光光度计在505nm处比色测定，依据吸光度与葡萄糖的定量关系推算出样品中的葡萄糖的含量。该方法操作简便、快速、分析效率高、准确度和精密度高、稳定性好，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于烟草成分检测技术领域，具体是涉及一种利用分光光度计对烟草及烟草制品中的葡萄糖含量进行快速准确检测的方法。

背景技术

烟草中的水溶性糖主要为葡萄糖、果糖、蔗糖，是烟草内重要的碳水化合物，在烟草燃吸过程中能调整适度的酸碱平衡，使吃味醇和，增加烟气的和顺性，与烟草品质密切相关。目前烟草行业常用芒森·沃克法(即费林试剂法)和连续流动分析法测定烟草中水溶性的还原糖和总糖，但这些方法测定的都是总量，不能测定单个成分的含量。随着烟草分析已逐渐从宏观深入到微观，对糖的分析也不应仅局限于水溶性总糖和水溶性还原糖的分析，应深入了解各种单糖的含量和对烟草品质的影响，因此对烟草中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定显得愈来愈重要。

目前，对烟草中葡萄糖的测定主要采用离子色谱法、近红外光谱法、气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等，但离子色谱法仪器昂贵，维护费用高，且操作繁琐；近红外光谱法必需先建立模型，不能用于直接检测；气相色谱需衍生化，操作较麻烦；高效液相色谱法前处理也较麻烦，如需用固相萃取柱预分离等；毛细管电泳法也需要对糖衍生化或使糖带电，才能进行分离检测。寻找一种更加简便、快速和准确的单糖测定方法一直是烟草检测领域技术人员努力的方向。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种快速、简便、能够准确测定烟草中葡萄糖含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

一种利用分光光度计快速测定烟草中葡萄糖含量的方法，具体采用以下步骤：

(1)样品前处理：

将烟草或烟草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎机研磨，过40目筛后得到烟末样品，取0.1g烟末样品于三角瓶中，加20mL水萃取样品中的葡萄糖，振荡30min后过滤得到滤液，作为待测样品溶液备用；

(2)绘制标准工作曲线：

准确配制浓度为5.55mmol/L的葡萄糖标液，分别移取该葡萄糖标液8、20、40、60、80和100μL置于2mL微量离心管中，在每个离心管中分别加入葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂盒(以下简称：试剂盒)中的试剂R₁和R₂各1000μL混匀，于37℃水浴显色10min后分别转移至1cm光程的比色皿中，得到对应葡萄糖浓度分别为0.022、0.055、0.109、0.162、0.213、0.264mmol/L的标准工作液，测定吸光度，以溶液的葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，所得标准工作曲线方程为：Y＝7.5067x-0.0132，相关系数r²＝0.9983；

(3)分析方法：

取待测样品溶液100μL置于2mL微量离心管中，分别加入试剂盒中的试剂R₁和R₂各1000μL混匀，于37℃水浴显色10min，转移至1cm光程的比色皿中，以蒸馏水分析液为参比，用分光光度计于波长505nm处测定吸光度，由标准工作曲线推算出待测样品溶液的葡萄糖浓度；

(4)结果计算：