[发明专利]一种志贺氏菌的稳定剂及其应用

说明书

本发明提供一种志贺氏菌的稳定剂，包含以下原料：植酸、谷氨酸钠、脱脂奶粉、甘油、甘露醇。本发明的志贺氏菌质控菌的稳定剂，可使质控菌冻干存活率达到90％以上，且能够在长期储存过程中保持细菌含量的稳定性。

技术领域

本发明微生物质量控制领域，尤其涉及一种志贺氏菌的稳定剂及其应用。

背景技术

真空冷冻干燥技术于上世纪70年代初期开始研发，现已商业化生产。冷冻干燥是将菌体在共溶点以下预冻，然后在低于三相点压力的高度真空状态下，使菌品中的冰升华，最后达到干燥的目的。但是在冷冻干燥过程中，易造成部分微生物细胞的损伤、死亡及某些酶蛋白分子的钝化，许多研究发现在细菌冻干前加入适当的物质能起到保护作用，即有效保护剂的使用对于细菌的冷冻干燥是成功的关键。在冻干过程中添加保护剂，在很大程度上可减轻或避免冷冻干燥对细胞带来的损伤。保护剂可以减轻或防止冷冻干燥或复水对细胞的损害，尽可能保持其原有的生理、生化特性和生物活性。

志贺氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌，易引起人类细菌性痢疾，临床表现为发热、腹痛、腹泻等症状，是常见的肠道致病菌。该菌广泛存在于禽肉、果蔬和乳制品等，感染剂量较低，仅需要10CFU以上的活菌就可能引起感染，因此对人类危害较大。现行食品微生物检验标准对志贺氏菌的检验流程进行了规范。而质控菌株是微生物检验中的阳性对照，能够验证检验方法、对检验人员进行能力验证、验收微生物培养基，保证微生物实验过程的质量控制，是微生物检验过程中的标准物质。定量质控菌株由于其使用方便，快速，提高检验效率等多种优点，是目前微生物检验过程质控标准物质的发展趋势。

目前还没有针对志贺氏菌定量质控菌株的制备方法，关键原因在于目前还未有一种稳定剂能够使志贺氏菌在冻干过程不受损失，且提高志贺氏菌在长期储存以及短期运输过程的稳定性。因此，提供一种志贺氏菌的稳定剂及志贺氏菌定量质控菌的制备方法，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种志贺氏菌的稳定剂及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

一种志贺氏菌的稳定剂，溶剂为水，其溶质包含以下原料：植酸、谷氨酸钠、脱脂奶粉、甘油、甘露醇。

在一些实例中，其溶质的质量组成为：2～4份植酸、1～3份谷氨酸钠、10～12份脱脂奶粉、1～3份的甘油、1～3份甘露醇。

在一些实例中，其溶质的质量组成为2％～4％植酸、1％～3％谷氨酸钠、10％～12％脱脂奶粉、1％～3％甘油、1％～3％甘露醇。

在一些实例中，其溶质的质量组成为2％～4％植酸、1％～3％谷氨酸钠、10％～12％脱脂奶粉、1％～2％甘油、1％～3％甘露醇。

本发明的第二个方面，提供：

一种志贺氏菌定量化质控品，由志贺氏菌与上述的稳定剂混匀后，定量后分装、冻干得到。

在一些实例中，志贺氏菌菌液与稳定剂(干重)的混合比为1000CFU/(0.1-0.3)g稳定剂(干重)。这样可以保证细菌可以充分被稳定剂保护，同时也不会过于浪费稳定剂。

在一些实例中，上述的定量化质控品中志贺氏菌的含量为300～1000CFU/支。当然，也可以根据实际的需要，选择其他的含量。该菌含量的偏差不大于20％。

本发明的第三个方面，提供：

一种志贺氏菌定量质控品的制备方法，包括如下步骤：

(1)菌株复苏：志贺氏菌接种至复苏培养基，复苏传代；

(2)增菌：复苏的志贺氏菌接种至增殖培养基中，培养增殖，得志贺氏菌菌液；