[发明专利]子宫内膜干细胞的定向成软骨分化培养

说明书

本发明公开了一种子宫内膜干细胞的定向成软骨分化培养方法，其特征在于：使用(2Z,5E)‑7‑羟基‑3,7‑二甲基‑2,6‑辛二烯‑1‑O‑[α‑L‑鼠李糖基(1→6)]‑β‑D‑葡萄糖苷进行诱导培养，本发明人发现，(2Z,5E)‑7‑羟基‑3,7‑二甲基‑2,6‑辛二烯‑1‑O‑[α‑L‑鼠李糖基(1→6)]‑β‑D‑葡萄糖苷可以用于高效诱导子宫内膜干细胞成软骨分化诱导得到软骨细胞，诱导8天即可分化为软骨细胞。

技术领域

本发明涉及一种子宫内膜干细胞的定向分化培养，属于干细胞培养技术领域。

背景技术

人子宫内膜是一个高度再生的组织，女性一生大约要经历子宫内膜400 多个周期的脱落和再生。研究发现，子宫内膜这种巨大的再生能力被认为与人类子宫内膜干细胞有直接关系，受到越来越多学者的关注。目前，子宫内膜干细胞分类较为多样化，包括子宫内膜细胞侧群( side population，SP) 、子宫内膜间充质干细胞、月经血来源的干细胞等，其中子宫内膜间充质干细胞因其数量较多，生物学特性明显人类子宫内膜是一种高度动态的组织，周期性地经历增殖期、分泌期、月经期，

具有显著的再生能力，能从月经后最初的 0.5- 1 毫米长到 5- 7 毫米。据文献报道，来源于子宫内膜组织的间充质干细胞不仅存在于基底层，经血中也存在。子宫内膜组织可全子宫切除术后标本、诊刮组织等中获取，即使绝经后期女性也可在无禁忌情况下应用雌激素刺激内膜生长来获取。hEMSCs 因其显著的增殖能力、容易获取，成为构建组织工程韧带具有吸引力的、新的细胞来源。等受到更多关注。

本发明旨在提供一种子宫内膜干细胞的定向分化培养成软骨细胞的方法，在软骨组织修复工程上可能具有很大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种子宫内膜干细胞的高效定向分化培养成软骨细胞的方法，在组织修复工程上可能具有很大的应用潜力。

豨莶为菊科（Asteraceae）豨莶属Siegesbeckia L.一年生草本植物，别名风湿草，肥猪草、黄花草、珠草等，为常用中药，始载于唐代《新修本草》。近期有人从中分离得到一个新化合物：(2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷，其结构式如下：

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本发明人发现，(2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷可以用于高效诱导子宫内膜干细胞成软骨分化诱导得到软骨细胞，诱导8天即可分化为软骨细胞。

本发明用到的成软骨诱导液配方：DMEM 低糖培养基+10%FBS+10-20µg/m L (2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷+50µg/mL 抗坏血酸。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种子宫内膜干细胞的高效定向分化培养成软骨细胞的方法，其包括：

使用(2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷进行诱导培养，(2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷结构如下：

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作为优选，本发明用到的成软骨诱导液配方：DMEM 低糖培养基+10%FBS+10-20µg/m L (2Z,5E)-7-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷+50µg/m L 抗坏血酸。

具体步骤如下：

hEMSCs 的原代培养：