[发明专利]截短的多价多元体

说明书

本发明涉及一种包括两个或更多个结合域的截短的多价多元体，其中每个结合域结合不同抗原或表位，且其中此类结合域中的两个经由铰链区配对，其中该多元体缺乏CH2或CH3区。本发明进一步包括在其包括两个或更多个二硫桥键的相应C末端处或附近配对的两个多肽，其中所述多肽各自包括可变结合域，该可变结合域包括可变区，其中每个可变区结合相同或不同的抗原或结合抗原上的相同或不同的抗原或表位。

技术领域

本发明涉并具有在C末端经由铰链配对的两个或更多个结合域的多价多元体(multivalent multimer)，以及用于制备此类多价多元体的方法。本发明进一步涉及能够结合两个或更多个表位或抗原的多价多元体的组成多肽，其中此类多肽经由包括二硫桥键的共价键配对。

背景技术

能够结合两种抗原或两个表位的多价抗体，诸如双特异性抗体是此项技术中已知的。此类多价结合蛋白可使用各种技术产生，此类技术包括细胞融合、化学缀合或重组DNA技术。

抗体通常包括四种蛋白质的多元体，该四种蛋白质包括两个一致重链及两个一致轻链，其中该重链包括一个可变域(VH)及三个恒定区(CH1、CH2、CH3)，且其中该轻链包括一个可变轻链域(VL)及一个恒定区(CL)。通常，该轻链经由非共价相互作用的影响以及经由二硫键与该重链配对。该两个重链在铰链区处经由二硫键且经由在该两个CH3域之间的界面中的氨基酸相互作用配对。VH与VL配对形成抗原结合域，且通常在VH及VL域中的三个表面环形成区，即互补决定区或CDR中发现变化。

此项技术中已知可结合两种不同抗原，或结合同一抗原内的两个不同表位的某些多价形式，诸如具有两个不同结合域的抗体，诸如双特异性抗体。此类形式可允许使用经校准的结合，该结合将允许该多价多元体选择性靶向表达两种抗原或表位的细胞或目标，诸如肿瘤细胞，而不靶向表达一种抗原的健康细胞或以较低水平靶向表达一种抗原的此类健康细胞。类似地，在多价多元体，诸如在双特异性抗体上具有两个不同结合域可允许结合不同抗原，由此可使用该多价多元体靶向单细胞上或两个相互作用的细胞上的抑制及刺激分子，使得该多价多元体的效应增强。多价形式也可用于使细胞，例如免疫调节细胞复位向，可使此类细胞复位向至肿瘤。

尽管此项技术中已描述某些多价抗体，但此项技术中仍需要新形式、及新连接子、以及用于制备此类形式的新方法，其允许高效地制造多价抗体形式，其中可容易地制备针对一组抗原的结合域并将其高效、稳定地转化成多价多元体，且其能够结合一大组抗原和表位，包括缺乏(部分或完全地)含CH2和/或CH3区的Fc区的此类形式。

产生缺乏Fc的多特异性形式，诸如F(ab′)2或F(ab′)n(其中n＝两个或更多个)形式可提供优于现有多特异性抗体的益处。例如，在可能希望经由靶向此类细胞和感兴趣的抗原来接合或复位向免疫调节细胞的情况下，此类靶向部分上Fc组分的存在可能在某些应用中不利地影响功效。

类似地，在较小尺寸优选的情况下，相较于全长形式，F(ab′)n多特异性形式可为所希望的，包括可能浸润物理肿瘤和/或提供较短半衰期，其中此类特征可有益于给药方案。重要的是，工程改造含有超过两个具有不同目标的结合域的F(ab′)n在传统上是耗时、低效和/或昂贵的。例如，此项技术中已知可经由多种方式产生F(ab′)2部分，此类方式各自具有缺点，其中目标是大量制造此类部分的均匀批料以用于治疗应用。

此项技术中已知的产生F(ab′)2的一种方式是通过化学方式实现。Nisonoff和Rivers在数十年前采用化学配对的制造。Nisonoff A，Rivers MM(1961)Arch BiochemBiophys 93：460。随后，已开发出使用同型双官能和异型双官能化学试剂的多种方法。到目前为止，归因于可经由此类化学方式制造的时间、成本、低数量和异质性，尚无化学方法能高效地或可行地用作开发治疗性多特异性F(ab′)n候选物的方法。类似地，此类化学合成F(ab′)n部分的方式还由于使用使该两个Fab域配对的合成方式而不利，该方式引起有关用于治疗应用的独立问题，以及制造问题。