[发明专利]二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物

权利要求书

1.二价双特异性抗体，其特征在于，所述二价双特异性抗体包括：

（1）a) 特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为重链IgG1恒定区CH1、铰链区部分序列、柔性肽和单链可变片段scFv；和b) 特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其中特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 20和SEQ ID NO: 21所示，特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ IDNO: 18和SEQ ID NO: 19所示，所述轻链恒定区CL为kappa链恒定区，所述铰链区部分序列为：EPKSCDK；

（2）a) 特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为重链IgG1恒定区CH1、铰链区部分序列、柔性肽和单链可变片段scFv；和b) 特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其中特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 19所示，特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ IDNO: 20和SEQ ID NO: 21所示，所述轻链恒定区CL为kappa链恒定区，所述铰链区部分序列为：EPKSCDK；

（3）a) 特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1和铰链区部分序列；和b) 特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为轻链恒定区CL和单链可变片段scFv，其中特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 20和SEQ ID NO: 21所示，特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ IDNO: 18和SEQ ID NO: 19所示，所述轻链恒定区CL为kappa链恒定区，所述铰链区部分序列为：EPKSCDK；或者

（4）a) 特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列，其连接顺序依次为单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1和铰链区部分序列；和b) 特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL，其连接顺序依次为轻链恒定区CL和单链可变片段scFv，其中特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 19所示，特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv中VL和VH的氨基酸序列分别如SEQ IDNO: 20和SEQ ID NO: 21所示，所述轻链恒定区CL为kappa链恒定区，所述铰链区部分序列为：EPKSCDK。

2.权利要求1所述二价双特异性抗体的制备方法，其特征在于，其包括下列步骤：

a) 用以下载体转化宿主细胞，

第一载体，其包括编码特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列的核酸分子，和

第二载体，其包括编码特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL的核酸分子；

b) 在容许合成抗体分子的条件下培养所述宿主细胞；

c) 从培养物中回收所述抗体分子。

3.编码权利要求1所述二价双特异性抗体的基因，其特征在于，其包括：

第一核酸分子，其为编码特异性结合第一抗原的抗体的单链可变片段scFv、柔性肽、重链IgG1恒定区CH1以及铰链区部分序列的核酸分子；和

第二核酸分子，其为编码特异性结合第二抗原的抗体的单链可变片段scFv和轻链恒定区CL的核酸分子。