[发明专利]免疫测定用杯及其制造方法、以及免疫测定方法

说明书

该荧光免疫测定用杯是在使用作为荧光标记的微珠、并且利用抗原抗体反应的免疫系统的分析中所使用的荧光免疫测定用杯，具有底面部和与所述底面部连接的侧面部，所述底面部具有各容纳1个所述微珠的多个孔状部，所述孔状部之间的区域的上表面为平面状。

技术领域

本发明涉及在利用生物体的抗原抗体反应以进行各种生物体分子或癌细胞等的检查的免疫系统的分析中所使用的免疫测定用杯及其制造方法、以及免疫测定方法。

本申请要求基于2018年10月24日提出的日本专利申请2018-199985号的优先权，其内容援引在本文中。

背景技术

抗原是病原性的病毒、细菌、花粉、鸡蛋以及小麦等会引起生物体发生免疫应答的物质。抗体是用于将进入到体内的抗原排出到体外而产生的免疫球蛋白的蛋白质总称。例如，疫苗是通过施予无毒化的病原性细菌或病毒，促使其在体内产生对抗病原体的抗体，从而获得对感染病的免疫。

在病原菌或癌细胞的检测、DNA的基因分析、或者环境有害物质等的测定等的所谓生物体测量的领域中，通过利用免疫反应对待测定的生物体物质(例如抗原)和与之选择性结合的检查用物质(例如抗体)之间的结合进行测定，可以实现对所述抗原等的种类和数量的测量。

如下述非专利文献1所记载的那样，作为公知的免疫系统的检查方法，一般采用以下方法：通过荧光色素、同位素等其他标记物质(以下，称为标记物)对用于捕捉待测定检体所含有的抗原的抗体直接或间接地进行标记，测量捕捉后(抗原抗体反应后)的来自标记物的荧光量或放射线量，从而用于诊断。

作为用于抗原等的测定的标记物，与需要严格管理的放射性同位素相比，一般使用操作方便的荧光标记物等。在使用荧光标记物等的光学方法中，通过使带有荧光标记物的抗体与抗原结合，测定来自该标记物的发光以进行抗原的测定和分析。作为其代表性方法，在酶免疫分析(例如，酶联免疫吸附剂测定：Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA)法中，利用的是附加在与抗原结合的抗体上的荧光标记物与试剂中的酶发生反应所产生的荧光。

为了易于观察生物体分子并识别测定对象的生物体分子，可以将金胶体或微粒等与荧光标记物一起附加到每个生物体分子上。例如，可以使用聚苯乙烯微珠作为微粒。通过将荧光标记物或微粒附加到生物体分子上，可以使由光学显微镜的分辨率难以观察到的尺寸的分子变得可视化。以下，将荧光标记物与微粒的组合记为荧光微珠或简记为微珠。

如上所述，在免疫测定中利用抗原抗体反应的分析中，为了添加含有待测定检体的血液等液体(以下，以血液为代表)、作为荧光标记的荧光微珠、促进发光(发色)反应的试剂等，可以使用试管类型的容器(例如，参照专利文献1、2)。

图10A是传统的免疫测定用杯50的俯视图以及从正面的剖面图。图10B是表示将多个荧光微珠62滴入到所述免疫测定用杯50中的状态的示意性剖面图。

即使使用传统的免疫测定用杯50，也可以检测出癌细胞等细胞水平的检测或大型蛋白质等大分子量的物质(例如分子量为60kDa以上)。另一方面，从图10B可以推测：当将多个荧光微珠62从滴加用夹具前端部61滴入到传统的免疫测定用杯50中时，荧光微珠62的排列变得不均匀。因此，荧光微珠62分散在血液和试剂混合的液体中，荧光因散射而减弱。因此，难以正确地测定并分析小分子量的蛋白质，例如5～60kDa左右的细胞因子等。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4095176号公报

专利文献2：日本专利第4522434号公报

非专利文献

非专利文献1：简单免疫学、p195～201、株式会社南江堂(2001年)

发明内容

本发明要解决的课题