[发明专利]工程化长散在元件(LINE)转座子及其使用方法

权利要求书

1.RNA成分，其包含DNA靶向序列，一个或多个蛋白质结合基序(PBM)以及待整合到DNA靶位点中的目标核酸序列，其中所述DNA靶向序列，蛋白质结合基序和目标序列可操作地连接，使得它们能够与源自亲本长散在(LINE)元件蛋白质的蛋白质成分结合并逆转录成cDNA，所述cDNA能够在DNA靶位点整合到DNA中。

2.根据权利要求1所述的RNA成分，其中所述蛋白质成分包含RNA结合结构域、接头结构域、逆转录酶、DNA内切核酸酶中的一个或多个，其中所述一个或多个蛋白质结合基序将所述RNA成分结合至所述蛋白质成分的所述RNA结合结构域、接头结构域、逆转录酶、DNA内切核酸酶或其组合。

3.根据权利要求1或2所述的RNA成分，

其中所述RNA成分包含来自或衍生自亲本LINE或SINE骨架的元件，并且所述RNA成分的目标核酸序列与LINE或SINE异源；

其中所述蛋白质成分包含来自或衍生自亲本LINE的元件；或

其组合。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的RNA成分，其中所述DNA靶向序列与所述亲本LINE或SINE是异源的。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的RNA成分，其中所述目标序列编码基因、基因的片段或功能性核酸。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的RNA成分，其包含来自或衍生自亲本LINE或SINE元件的3'PBM序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的RNA成分，其包含CRISPR/Cas示踪序列、CRISPR/Cas引导序列或其组合。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的RNA成分，其包含来自或衍生自亲本LINE或SINE元件的5'PBM序列。

9.根据权利要求8所述的RNA成分，其中所述5′PBM包含非功能性IRES序列。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的RNA成分，其进一步包含核酶。

11.根据权利要求10所述的RNA成分，其中所述核酶是丁型肝炎病毒样核酶。

12.根据权利要求2-10中任一项所述的RNA成分，其中所述亲本LINE或SINE是限制样内切核酸酶(RLE)LINE。

13.根据权利要求10所述的RNA成分，其中RLE LINE是R2 LINE。

14.根据权利要求3-13中任一项所述的RNA成分，其中所述RNA成分的亲本LINE或SINE骨架与所述蛋白成分的亲本LINE骨架是相同的LINE和/或所述SINE源自LINE的祖先或是LINE的祖先。

15.蛋白质成分，其包含DNA结合结构域、RNA结合结构域、逆转录酶、接头结构域和内切核酸酶，其中所述DNA结合结构域、RNA结合结构域、逆转录酶、接头结构域和内切核酸酶可操作地连接，使得它们可以在DNA靶位点与RNA成分和DNA结合，并促进RNA成分逆转录成cDNA，和cDNA在DNA靶位点整合到DNA中。

16.根据权利要求15所述的蛋白质成分，其中所述RNA成分包含DNA靶向序列，一个或多个蛋白质结合基序以及待整合到所述DNA靶位点的目标核酸序列。