[发明专利]用于鉴定目的蛋白质的方法

权利要求书

1.一种鉴定目的蛋白质的方法，其包括：

(a)筛选表达蛋白质的细胞的第一文库；

(b)鉴定并挑选表达具有所需功能的所述蛋白质的所述细胞；

(c)生成包括表达具有所需功能的所述蛋白质的所述细胞的第二文库；

(d)将所述第二文库的溶液排列到一个或多个微量滴定板中；

(e)用声学分配器将指定体积的所述第二文库的每种溶液从所述一个或多个微量滴定板转移到一个或多个琼脂托盘上；

(f)在适于在所述一个或多个琼脂托盘上生长菌落的条件下温育所述一个或多个琼脂托盘；

(g)使用机器人挑选所述一个或多个菌落；

(h)将所述一个或多个菌落转移到液体培养基中；

(i)在所述液体培养基中生长培养物并分离编码具有所需功能的所述目的蛋白质的DNA；以及

(j)对所述目的蛋白质的所述DNA进行测序，从而鉴定所述目的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述目的蛋白质是酶、肽、抗体或其抗原结合片段、蛋白质抗生素、融合蛋白、疫苗或疫苗样蛋白质或颗粒、生长因子、激素或细胞因子。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述酶选自由以下组成的组：淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、葡糖淀粉酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、植酸酶和纤维素酶。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞是选自细菌细胞或古细菌细胞的原核细胞。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞是选自真菌细胞、酵母细胞、动物细胞或植物细胞的真核细胞。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述细胞是大肠杆菌细胞、芽孢杆菌细胞、木霉菌细胞、驹形氏酵母(Komagataella)细胞、曲霉菌细胞、热霉菌细胞或酵母菌细胞。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述目的蛋白质的所需功能选自由以下组成的组：酶活性、底物特异性、表达滴度及其任何组合。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个微量滴定板包括孔，其中所述孔的数目选自：6、12、24、48、96、384或1563。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，在将细胞的所述第二文库排列到所述一个或多个微量滴定板中之前制备所述溶液的稀释液。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述稀释液是连续稀释液，并且其中所述稀释液在步骤(d)中排列。

12.根据权利要求11所述的方法，其中将所述连续稀释液重复5次、4次、3次或2次。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述溶液是包括甘油储备液的液体。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(e)中使用所述声学分配器从所述一个或多个微量滴定板转移到所述一个或多个琼脂托盘上的所述指定体积选自1nL、2nL、3nL、4nL、5nL、6nL、7nL、8、nL、9nL、10nL、11nL、12nL、13nL、14nL、15nL、16nL、17nL、18nL、19nL、20nL、21nL、22nL、23nL、24nL、25nL、26nL、27nL、28nL、29nL、30nL或更多。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(e)中，所述一个或多个琼脂托盘位于所述一个或多个微量滴定板的上方，并且其中所述一个或多个琼脂托盘被定向成使得其琼脂表面面向所述一个或多个微量滴定板。