[发明专利]制备负载mRNA的脂质纳米颗粒的改进方法

权利要求书

1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括：

混合包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液，使得形成包封mRNA的脂质纳米颗粒，

其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和/或所述mRNA以不大于0.5mg/ml的浓度存在于所述溶液中。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml或0.01mg/ml的浓度存在。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述mRNA以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、或0.01mg/ml的浓度存在于所述溶液中。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.1mg/ml的浓度存在于所述溶液中。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.05mg/ml的浓度存在于所述溶液中。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括稀释所述溶液以达到不大于0.5mg/ml的浓度的步骤。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒包含PEG修饰的脂质。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的小于3％、小于2.5％、小于2％、小于1.5％或小于1％。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的0.1％至3％、或0.75％至2.5％、或0.5％至2％。

10.如权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约1％。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于10mM的柠檬酸盐。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于25％的非水性溶剂。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述混合之后将所述脂质纳米颗粒和所述mRNA加热至高于环境温度的温度。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述混合之前将所述mRNA和/或所述预先形成的脂质纳米颗粒加热至高于环境温度的温度。

15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述温度为或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。

16.如权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述温度在约25-70℃、约30-70℃、约35-70℃、约40-70℃、约45-70℃、约50-70℃或约60-70℃的范围内。

17.如权利要求13-16中任一项所述的方法，其中所述温度为约65℃。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒通过将溶解在乙醇中的脂质与水性溶液混合而形成。