[发明专利]用于从使用分子阱的测定除去生物素干扰的方法和组合物

说明书

本发明涉及从某些测定除去或减少生物素干扰的方法和组合物。

本申请根据35 USC § 119(e)要求2018年9月25日提交的美国临时申请号62/735,911的权益。上述引用的专利申请的全部内容在此明确通过引入并入本文。

发明领域

本发明涉及用于测定以及用于从此类测定除去干扰、尤其是生物素干扰的方法和组合物。

发明背景

在现代的体外临床诊断中，各种方法被用于检测样品中的分析物。在诊断方法的一种形式(免疫测定法)中，使用一种或多种特异性结合物质。典型的实例是夹心免疫测定法(其中两种特异性结合物质(抗体或抗原)结合目标分析物)，和竞争性免疫测定法(其中目标分析物和该分析物的类似物竞争结合特异性结合物质)。在竞争性免疫测定法中，抗原经常也称为半抗原或配体。特异性结合物质之一通常附接至所谓的标记物或标签，其可以是原子(例如，放射性)，分子(例如，酶、荧光或发光化合物)或颗粒(磁性或乳胶)。该标记物允许通过对应于利用的标记物的各种检测方法来检测目标分析物。在竞争性测定法中，特异性结合物质或分析物类似物可以携带标记物。其他特异性结合物质通常与固体或可悬浮的基质(“固相”)共价或通过吸附结合。或者，可以将特异性结合物质连接至第二结合对的第一成员(例如，生物素)，而将第二结合对的第二成员(例如，链霉抗生物素蛋白)附接至固相。这允许特异性结合物质经由第二结合对相互作用(例如，生物素-链霉抗生物素蛋白)结合至固相。

半抗原、诸如生物素和荧光素经常用于与测定试剂中的抗体或其他小药物分子缀合。它们与包被在固体支持物上的大蛋白分子(例如，链霉抗生物素蛋白与生物素以及抗FITC抗体与荧光素)的紧密结合提供了将半抗原-Ab或半抗原-药物固定在固体表面上的便利方法。由于生物素和链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白之间的结合力展示生物分子的最高常数之一，所以生物素非常经常用作配体，并且链霉抗生物素蛋白非常经常用作其特异性结合配偶体。

对于诊断测定的稳定性和再现性而言重要的是，固相结合的物质对其结合配偶体的结合能力并不随着时间变得受损害。这可能导致可靠性降低和测定灵敏度降低。可能导致这种损害(表现为不稳定性)的一种机制是一部分固相附接的物质流入周围的介质中。游离物质与固相附接的物质竞争结合靶标，并且由于其更快的扩散而通常具有显著的动力学优势。因此，有利的是将与试剂中的固相附接的物质竞争的游离物质的量保持恒定，优选非常接近于零。这将允许以稳定且可再现的方式灵敏地检测分析物。消除游离物质的优选方式是找到将消除解离的结合方法。由于其更大的键强度，与吸附缔合相反，共价键合可能是一种选择方法。然而，在许多情况下，由于各种原因，这可能是不可能的或不切实际的。

生物素已用作补充剂。例如，作为食品补充剂的生物素旨在促进健康的毛发和指甲生长并治疗其他疾病状况。因此，血清中生物素的量可能相当高。因为在许多诊断测定中使用分子、诸如生物素来包被固体支持物、结合抗体或半抗原类似物，所以血液中这些高水平的生物素可能干扰测定信号。因此，如果生物素以游离形式存在于样品溶液中，则其占据结合位点，并且因此可以导致测试结果错误。这在接受高剂量生物素的患者的情况下尤其关键。假定样品中超过30 ng/ml的量的生物素已经导致歪曲的结果。在用生物素治疗的患者的情况下，可能出现最高达180 ng/ml或甚至最高达1500 ng/ml的血清值和约70 ng/ml的持久值。

一种减轻这种干扰的方法涉及使用预制的试剂，即在试剂生产期间与链霉抗生物素蛋白包被的固体支持物预结合的生物素化的测定组分。由于链霉抗生物素蛋白和生物素之间的紧密结合和缓慢的解离速率，用患者样品中的进入生物素从链霉抗生物素蛋白替换已经结合的生物素不是一个主要过程。

第二种方式是增加固相支持物上的链霉抗生物素蛋白结合位点，使得除了生物素化的测定组分外，还有额外的可用于样品生物素分子的结合位点。第三种方式是上述两者的组合。但是，除非我们完全避免使用生物素-链霉抗生物素蛋白作为活性测定组分，否则上述方式均无法真正解决生物素干扰问题。