[发明专利]抗体或抗体样分子的纯化方法

说明书

本发明的目的在于提供能够从包含杂质的抗体或抗体样分子的水溶液或悬浮液中高效地去除杂质的方法。本发明的抗体或抗体样分子的纯化方法包括：用包含选自镁、钙及铝中的1种以上元素的水不溶性无机化合物对包含杂质的抗体或抗体样分子的水溶液或悬浮液进行处理的工序。

技术领域

本发明涉及从包含杂质的组合物中减少杂质并提高目标抗体或抗体样分子的纯度的方法。

背景技术

近年来，从生物体试样的提取或使用基因重组技术生产的抗体等有用蛋白质已经用于以医药品为代表的食品、工业用酶、吸附剂、传感器等很多的用途，其高效率的高纯度纯化成为了问题。杂质多数情况下对目标的有用蛋白质的功能造成影响、或者成为副作用的原因，为了确保有用蛋白质的有效性和安全性，需要将这些杂质除去，高度地进行纯化。例如，在以重组蛋白质、肽这样的有用蛋白质作为主要药物的生物医药品的领域中，在通过基因重组技术以动物细胞、植物细胞、细菌细胞作为宿主将目标的有用蛋白质进行重组表达后，进行高纯度纯化。培养重组动物细胞、植物细胞、细菌细胞而生产的有用蛋白质有分泌在培养上清中的蛋白质、在细胞内可溶性表达的蛋白质、在细胞内以包涵体的形式不溶性表达的蛋白质。培养上清中表达的有用蛋白质通过离心分离、膜处理而从宿主的动物细胞、植物细胞、细菌细胞、其片段、其它的不溶性成分中被分离，然后，通过色谱、膜分离工艺进行高纯度纯化。在细胞内可溶性表达的有用蛋白质通过将细胞溶解或破碎等方法进行提取，通过将不溶性成分离心分离、膜处理而去除后，通过色谱、膜分离工艺进行高纯度纯化。在细胞内不溶性表达的有用蛋白质通过将细胞溶解或破碎等方法进行提取后，从由通过将可溶性成分离心分离、膜处理而去除的残渣进行可溶化提取而得到的包含杂质的有用蛋白质溶液中，利用色谱、膜分离工艺进行高纯度纯化。

供于色谱、膜分离工艺的包含有用蛋白质的溶液包含来自于宿主的夹杂蛋白质、核酸、细胞、细胞器的膜片段及培养基成分等大量的杂质，因此对色谱、膜分离工艺的负担大，会导致色谱载体的吸附容量降低、分离能力降低、背压(back pressure)上升引起的处理速度降低、清洗、再生效率的降低引起的载体寿命降低。另外，在膜分离工艺中，也会导致每单位膜面积的处理容量降低、背压上升、处理速度降低、清洗、再生效率降低引起的载体寿命降低。大量杂质会对基于色谱、膜分离工艺的高纯度纯化造成很大的负担，因此，在这些处理前减少杂质对于后续工序的负担减小是非常重要的。

作为对包含杂质的有用蛋白质溶液进行处理而减少杂质的技术，已知有将多胺(非专利文献1)、壳聚糖(非专利文献2)、低pH下游离的2价阳离子(专利文献1)、聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDACMAC，非专利文献3)、核酸内切酶(非专利文献4)等水溶性的添加剂进行添加处理的方法、通过pH调整(非专利文献5)、热处理(专利文献2)将杂质沉淀去除的方法。

抗体等有用蛋白质的纯化通常在水体系中进行，因此，水溶性的添加剂在后续工序中的去除成为问题。此外，添加剂、其片段自身吸附于有用蛋白质等，其后续的去除工艺的构建困难，而且残留物的安全性、数值管理成为问题。例如，在有用蛋白质为医药品的情况下，从安全性的观点考虑，需要预先高度地进行纯化，美国食品药品监督管理局(Foodand Drug Administration)在Q3A指导原则中严格要求了残留杂质的管理。核酸内切酶可以在其它夹杂蛋白质等杂质去除时通过设定色谱的条件而容易地去除，因此是优异的。另一方面，核酸内切酶可以将DNA片段化而无效化，并且对于提高片段化的DNA的色谱、膜分离除去效率是有效的，但是，对于夹杂蛋白质等的除去没有效果，作为杂质去除方法是不足的。另外，对于pH处理、热处理而言，将目标的有用蛋白质的功能降低、变性、凝聚、分解的风险高，通过严密的工序参数的管理、处理而生成的目标产物来源的聚集体、片段及修饰体这样的杂质的去除成为新的问题。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2010-508352号公报

专利文献2：日本特开昭63-275600号公报

非专利文献