[发明专利]细胞制造方法在审
申请号: | 201980050988.3 | 申请日: | 2019-08-02 |
公开(公告)号: | CN112912490A | 公开(公告)日: | 2021-06-04 |
发明(设计)人: | 山添则子;日吉秀行;豊田太郎 | 申请(专利权)人: | 国立大学法人京都大学;武田药品工业株式会社 |
主分类号: | C12N5/00 | 分类号: | C12N5/00;C12N5/071;C12N5/073 |
代理公司: | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人: | 封新琴 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 细胞 制造 方法 | ||
1.一种由多能干细胞制造胚体内胚层细胞的方法,所述方法包括:
将多能干细胞在作用胰岛素的条件下的分化诱导培养基中进行第一培养,然后在未作用胰岛素的条件下的分化诱导培养基中进行第二培养的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,
在含有胰岛素的分化诱导培养基中进行第一培养,在不含有胰岛素的分化诱导培养基中进行第二培养。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,
在含有胰岛素且不含有胰岛素信号抑制剂的分化诱导培养基中进行第一培养,在含有胰岛素和胰岛素信号抑制剂的分化诱导培养基中进行第二培养。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中,
进行第一培养和第二培养的分化诱导培养基中还含有丙酮酸盐。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中,
进行第一培养和第二培养的分化诱导培养基中还含有L-亮氨酰-L-亮氨酸。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中,
进行第一培养和第二培养的分化诱导培养基中还含有15mM以上的葡萄糖。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中,
所述方法包括进行6小时至48小时的第一培养的步骤。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中,
所述方法包括进行至少6小时的第二培养的步骤。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中,
在三维培养体系中实施所述方法。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中,
在二维培养体系中实施所述方法。
11.根据权利要求10所述的方法,其中,
在第一培养开始时,含有15万至30万个细胞/cm2的多能干细胞。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法,其中,
分化诱导培养基以DMEM,即Dulbecco改良Eagle培养基为基础。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中,
第一培养的分化诱导培养基含有ROCK抑制剂和/或GSK3β抑制剂。
14.一种胰岛素产生细胞的制造方法,包括:
进一步对通过将多能干细胞在作用胰岛素的条件下的分化诱导培养基中进行第一培养,然后在未作用胰岛素的条件下的分化诱导培养基中进行第二培养而制造的胚体内胚层细胞进行分化诱导的步骤。
15.一种胰岛素分泌细胞的制造方法,包括:
进一步对通过在含有胰岛素的分化诱导培养基中对多能干细胞进行第一培养,然后在不含有胰岛素的分化诱导培养基中进行第二培养而制造的胚体内胚层细胞进行分化诱导的步骤。
16.一种胰岛素分泌细胞的制造方法,包括:
进一步对通过在含有胰岛素且不含有胰岛素信号抑制剂的分化诱导培养基中对多能干细胞进行第一培养,然后在含有胰岛素和胰岛素信号抑制剂的分化诱导培养基中进行第二培养而制造的胚体内胚层细胞进行分化诱导的步骤。
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