[发明专利]肽融合蛋白质

说明书

本发明的目的为提供能够以低成本生产可用于靶分子纯化的具有特异性结合能力的肽的方法，具体而言，涉及包含1个以上具有特异性结合能力的肽和支架蛋白质的肽融合蛋白质，其中，所述肽被直接或介由肽接头插入至所述支架蛋白质的氨基酸序列中，以及/或者被连接于所述支架蛋白质的N末端及/或C末端。

技术领域

本发明涉及例如肽融合蛋白质、包含该肽融合蛋白质的固相担载体、包含该固相担载体的靶分子分离用柱、包含该固相担载体或柱的试剂盒、及使用该固相担载体或柱的靶分子的纯化方法等。

背景技术

包括IgG抗体等抗体在内的蛋白质是目前最受瞩目的生物医药品之一。例如，近年来，以IgG抗体为核心的抗体药物开始应用于医药领域，在工业用途、制药用途中的重要性逐渐提高。抗体的纯化中，蛋白A柱起到核心作用，大多数的抗体药物制造商引入了以该柱为核心的纯化体系。该蛋白A利用基因重组法而在大肠杆菌中大量生产。

另一方面，本申请的发明人迄今为止报道了可利用介由二硫键环化而成的包含特定序列的肽配体(专利文献1)、或介由具有特定结构的接头将肽中的半胱氨酸残基的硫醚基交联而成的IgG结合肽(专利文献2)来纯化IgG。

上述肽配体或IgG结合肽可用于取代蛋白A的新型亲和柱，但另一方面，其是通过化学合成而制造的，存在与蛋白A相比生产成本较高的问题。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2013/027796号

专利文献2：国际公开第2018/092867号

发明内容

发明所要解决的课题

鉴于上述实际情况，本发明的目的为提供能够以低成本生产具有特异性结合能力的肽的方法，所述肽可用于纯化包括IgG等抗体在内的靶分子。

用于解决课题的手段

为了解决上述课题而进行了锐意研究，结果发现，将具有特异性结合能力的肽制成与在大肠杆菌等宿主细胞中生产率高的蛋白质形成的融合蛋白质，能够利用与化学合成相比成本更低的基因重组法进行生产。另外，还发现该融合蛋白质可通过包含2个以上具有特异性结合能力的肽，从而利用亲合力效应而使得该融合蛋白质的靶分子结合能力提高，较之具有特异性结合能力的肽单独、或较之包含1个具有特异性结合能力的肽的融合蛋白质而言，与靶分子结合相关的解离速率减慢，从而成为高亲和性，从而完成了本发明。

即，本发明包括以下内容。

(1)肽融合蛋白质，其包含1个以上具有特异性结合能力的肽和支架蛋白质，其中，所述肽被直接或介由肽接头插入至所述支架蛋白质的氨基酸序列中，以及/或者被连接于所述支架蛋白质的N末端及/或C末端。

(2)如(1)所述的肽融合蛋白质，其中，所述具有特异性结合能力的肽为抗体结合肽。

(3)如(2)所述的肽融合蛋白质，其中，所述抗体结合肽选自由IgG结合肽、IgA结合肽及IgY结合肽组成的组。

(4)如(3)所述的肽融合蛋白质，其中，所述IgG结合肽为具有环状结构的肽。

(5)如(1)～(4)中任一项所述的肽融合蛋白质，其包含2个以上的所述肽。

(6)如(1)～(5)中任一项所述的肽融合蛋白质，其中，所述支架蛋白质为具有β桶形结构(β-barrel structure)的蛋白质。

(7)如(6)所述的肽融合蛋白质，其中，所述具有β桶形结构的蛋白质为绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(DsRed)或它们的突变体。