[发明专利]从条件性重编程细胞获得动物模型的方法以及该动物模型用于筛选抗肿瘤药物的用途

说明书

一种从条件性重编程肿瘤细胞获得用于筛选抗肿瘤药物的动物模型的方法以及使用该动物模型来筛选抗肿瘤药物的方法。

技术领域

本发明涉及一种用于将从患者的肿瘤活检样本中获得的原代肿瘤细胞在体内和体外条件下培养的组合物、一种将所获得的原代肿瘤细胞在该组合物中培养的方法、一种使用该动物模型获得用于筛选抗肿瘤药效的动物模型的方法。

背景技术

条件性重编程(CR)是一种可用于快速有效地从正常细胞和患病细胞(包括肿瘤细胞)建立来源于患者的细胞培养物的细胞培养技术。CR的最大优势在于其可以从患者组织样本中快速有效地扩增细胞培养物。这使得研究者可以足够快地筛选肿瘤对抗癌药物或免疫疗法的敏感性，从而提供临床使用信息。

在动物模型中测试抗肿瘤药物的功效是重要的，因为此类动物模型对于抗肿瘤药物筛选是重要的。此类动物模型将模拟患者的体内环境，反映出患者的响应，因此更加有效。为了建立动物模型，本领域技术人员通常需要获得数量足够多的肿瘤细胞。然而，从患者获得的肿瘤样本可能包含非常少量或者甚至微量的肿瘤细胞，这取决于获得它们的方式。例如，从穿刺活检获得的肿瘤样本可能包含非常少量的肿瘤细胞，因此，本领域技术人员难以使用它们来建立用于筛选抗肿瘤药物的所需动物模型。

通过条件性重编程而进行的肿瘤细胞永生化是针对基于细胞的诊断、药敏实验和体外生物样本库而产生培养肿瘤细胞的非常重要的工具。但是，如何有效且成功地培养从患者获得的原代肿瘤细胞(特别是从例如穿刺活检获得少量或者甚至微量的细胞样本)依然是一项挑战。

发明内容

为了解决上述问题，对于来自多种肿瘤类型的原代肿瘤细胞，本发明人针对永生化成功地进行了条件性重编程，并使用经过条件性重编程的肿瘤细胞来建立用于测试抗肿瘤药物的动物模型。原代肿瘤细胞从手术组织、活检或穿刺活检样本中获得。本发明中获得的条件性重编程的原代肿瘤细胞显示出典型的克隆样生长，且在低温冻存后保持良好。一些情况下，细胞可多次传代，变成有用的细胞系。与原代肿瘤细胞一样，条件性重编程的肿瘤细胞对于在体外测试药物敏感性是可靠的。本发明人已经成功地将条件性重编程的肿瘤细胞(CRC)植入到用于测试药效的动物模型中，并使用该动物模型来筛选抗肿瘤药物。本发明还公开了条件性重编程的肿瘤细胞在药效试验中的用途。

本发明的一个方面提供了一种获得用于筛选抗肿瘤药物的动物模型的方法，其包括：

(1)在组合物中培养从患者的肿瘤活检样本获得的原代肿瘤细胞，该组合物包含：

a)0.01-1.0mg/L氢化可的松；

b)1.0-10.0mg/L菊粉；

c)1.0-20.0μg/L霍乱毒素；

d)2.0-50.0mg/L腺嘌呤；

e)1.0-30.0μg/L EGF；

f)1.0-30.0μmol/L Y-27632；

g)青霉素/链霉素(Pen/Strep)；

h)2-20％FBS；

i)F12培养基；

j)高糖DMEM，以及可选地

k)非必需氨基酸溶液；

l)GlutaMAX补充剂；

(2)将步骤(1)中获得的原代肿瘤细胞植入到动物中。在实施方案中，本发明方法的步骤(1)中的组合物包含：

a)0.3-0.5mg/L，优选0.4mg/L氢化可的松；

b)4-6mg/L，优选5mg/L菊粉；