[发明专利]用于纯化重组蛋白的完全流穿过程

权利要求书

1.一种从溶液纯化蛋白质的方法，所述方法包括：

(a)过滤步骤，其包括：

-使所述溶液以所述流穿方式通过至少一种螯合剂基质，

-从所述至少一种螯合剂基质的流穿物回收经过滤的蛋白质溶液；

(b)交换步骤，其包括：

-使用用于所述交换的仅一种缓冲液使在步骤(a)结束时获得的所述经过滤的蛋白质溶液通过至少一层渗滤膜，

-回收所述至少一层渗滤膜的含部分纯化的蛋白质的渗余物；

(c)精细纯化步骤，其包括：

-使在步骤(b)结束时获得的所述渗余物以所述流穿方式通过膜吸附器组合，其中所述膜吸附器组合的两个膜吸附器在作用机制方面是正交的，并且所述膜吸附器组合已预先用与步骤(b)中用于交换的所述一种缓冲液相同的平衡缓冲液进行平衡，

-从所述膜吸附器组合的流穿物回收纯化的蛋白质；

其中所述纯化方法不包括蛋白A色谱法步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在不进行任何处理诸如pH调节、缓冲液更换或稀释的情况下，使在步骤(a)结束时获得的所述经过滤的蛋白质溶液直接通过所述至少一层渗滤膜。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在不进行任何处理诸如pH调节、缓冲液更换或稀释的情况下，使在步骤(b)结束时获得的所述渗余物直接通过所述膜吸附器组合。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法在(a)、(b)和(c)三个步骤之间不包括任何中间储存。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法具有功能上封闭的流路。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述整个纯化方法仅使用一种缓冲液。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述一种缓冲液包含Tris、Tris-HCl、Bis Tris、磷酸盐和/或柠檬酸，特别是包含以下项或由以下项组成：(i)Bis Tris、Tris或Tris-HCl，(ii)乙酸，(iii)水和(iv)任选的盐。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述过滤步骤的所述至少一种螯合剂基质选自活性炭、硅藻土、自由阳离子交换树脂、自由阴离子交换树脂和自由混合模式树脂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述至少一种螯合剂基质是两种不同螯合剂基质的组合。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述两种不同螯合剂基质的组合是活性炭和自由阴离子交换树脂的组合。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述交换步骤的所述至少一层渗滤膜为单路切向流过滤(SPTFF)模块或切向流过滤(TFF)模块。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述交换步骤的所述至少一层渗滤膜为盒、中空纤维或螺旋缠绕的形式。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中在所述交换步骤中浓缩所述经过滤的蛋白质溶液。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述精细纯化步骤的所述膜吸附器组合是至少两个膜吸附器的组合，所述至少两个膜吸附器选自阳离子交换膜吸附器、阴离子交换膜吸附器、多模态膜吸附器和疏水相互作用膜吸附器。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述精细纯化步骤的所述膜吸附器组合是阳离子交换膜吸附器和阴离子交换膜吸附器的组合。

16.根据权利要求1至15中任一项的所述方法，其进一步包括步骤(c)之后的纳米过滤步骤。