[发明专利]抗-MUC1抗体

说明书

本发明涉及针对癌症抗原MUC1的新抗体。具体地，通过在已知的抗‑MUC1抗体的CDR‑H2中缺失糖基化位点，得到具有改善的抗原结合的抗体。

发明领域

本发明涉及抗体领域。提供了具有增加的抗原结合亲和力的突变的抗-MUC1抗体。具体地，提供了人源化抗体PankoMab的突变形式，其中重链可变区的天冬酰胺57被另一种氨基酸置换。从而，CDR2区域中的糖基化位点被缺失并且抗原结合亲和力增加。在具体实施方案中，本发明涉及该抗体的治疗和诊断用途以及产生这样的抗体的方法。

发明背景

针对肿瘤相关抗原的抗体是广泛使用的针对癌症的治疗剂。今天，许多抗癌抗体被批准用于人类治疗。这些抗体中的一些通过阻断对特定癌细胞的存活或增殖至关重要的某些信号传递途径起作用。其它抗癌抗体活化患者针对被靶向的癌细胞的免疫应答，例如启动通过天然杀伤细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。通过抗体的Fc部分与免疫细胞上的Fc受体的结合诱导该机制。

一组有趣且重要的抗体是针对粘蛋白的抗体。粘蛋白是由脊椎动物中的许多上皮组织产生的高分子量、高度糖基化的蛋白质家族。它们可以细分为由于疏水跨膜结构域（其有利于保留在质膜中）的存在而膜结合的粘蛋白，以及分泌到粘膜表面或分泌以变成唾液组分的粘蛋白。人粘蛋白家族由许多家族成员组成，包括膜结合的MUC1。

在许多腺癌中发生增加的粘蛋白产生，包括胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌等。粘蛋白也在肺病诸如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病或囊性纤维化中过度表达。已经关于它们在疾病过程中的病理学意义广泛研究了两种膜粘蛋白MUC1和MUC4。此外，还关于它们作为诊断标志物的潜力研究了粘蛋白。针对粘蛋白(Clin. Cancer Res., 2011 Nov1; 17(21):6822-30, PLoS One，2011 Jan 14;6(1):e15921)、特别是MUC1的几种抗体是本领域已知的。但是，仍可以改善它们的治疗功效。

鉴于此，本领域需要提供具有改善的性能的治疗性抗-MUC1抗体。

发明内容

本发明的发明人已经发现，缺失抗-MUC1抗体PankoMab的重链可变区中的糖基化位点不会消除抗原结合，而是出乎意料地增加了所述抗体的抗原亲和力。鉴于糖基化位点位于重链可变区的第二互补性决定区(CDR-H2)，这尤其令人惊讶。CDR是抗体中直接参与抗原结合并提供与表位的接触的那些区域。因此，通常预期修饰CDR的氨基酸对抗原结合亲和力是有害的。人源化的PankoMab抗体另外包含CDR-H2中的糖基化位点，该位点具有大碳水化合物结构。该碳水化合物结构直接存在于与抗原的结合界面上，且因此被认为参与抗原结合。但是，如在实施例中证实的，PankoMab变体(PM-N54Q)（其中通过置换带有碳水化合物结构的氨基酸来缺失糖基化位点）显示出增加的抗原结合亲和力。

因此，在第一方面，本发明涉及能够结合MUC1的抗体，其包含

(i) 重链可变区，其包含以下互补性决定区(CDR)：具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDR-H1，具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDR-H2，和具有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDR-H3，和

(ii) 轻链可变区，其包含以下互补性决定区(CDR)：具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDR-L1，具有SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDR-L2，和具有SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR-L3。

在第二方面，本发明提供了编码根据本发明的抗体的核酸。此外，在第三方面，提供了包含根据本发明的核酸和与所述核酸可操作地连接的启动子的表达盒或载体，在第四方面，提供了包含根据本发明的核酸或表达盒或载体的宿主细胞。

在第五方面，本发明提供了一种缀合物，其包含缀合至其它试剂的根据本发明的抗体。