[发明专利]新颖腺相关病毒(AAV)载体、具有降低的衣壳脱酰胺化的AAV载体及其用途

权利要求书

1.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包括：

(A)AAVrh79衣壳，所述AAVrh79衣壳包括以下中的一种或多种：

(1)AAVrh79衣壳蛋白，所述AAVrh79衣壳蛋白包括：

AAVrh79 vp1蛋白的异质群体，所述AAVrh79 vp1蛋白选自以下：通过从对SEQ ID NO:2的1到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列的表达产生的vp1蛋白、从SEQ ID NO:1产生的vp1蛋白或从与SEQ ID NO:1至少70％相同的对SEQ ID NO:2的1到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列产生的vp1蛋白，

AAVrh79 vp2蛋白的异质群体，所述AAVrh79 vp2蛋白选自以下：通过从对SEQ ID NO:2的至少约氨基酸138到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列的表达产生的vp2蛋白、从包括SEQ ID NO:1的至少核苷酸412到2214的序列产生的vp2蛋白或从与SEQ ID NO:1的至少核苷酸412到2214至少70％相同的对SEQ ID NO:2的至少约氨基酸138到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列产生的vp2蛋白，

AAVrh79 vp3蛋白的异质群体，所述AAVrh79 vp3蛋白选自以下：通过从对SEQ ID NO:2的至少约氨基酸204到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列的表达产生的vp3蛋白、从包括SEQ ID NO:1的至少核苷酸607到2214的序列产生的vp3蛋白或从与SEQ ID NO:1的至少核苷酸607到2214至少70％相同的对SEQ ID NO:2的至少约氨基酸204到738的预测的氨基酸序列进行编码的核酸序列产生的vp3蛋白；和/或

(2)vp1蛋白的异质群体，所述vp1蛋白作为对SEQ ID NO:2的氨基酸序列进行编码的核酸序列的产物；vp2蛋白的异质群体，所述vp2蛋白作为对SEQ ID NO:2的至少约氨基酸138到738的氨基酸序列进行编码的核酸序列的产物；以及vp3蛋白的异质群体，所述vp3蛋白作为对SEQ ID NO:2的至少氨基酸204到738进行编码的核酸序列的产物，其中：所述vp1蛋白、所述vp2蛋白和所述vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群体，所述氨基酸修饰包括SEQ IDNO:2中的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步包括包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群体，其中脱酰胺化引起氨基酸变化；以及

(B)所述AAVrh79衣壳中的载体基因组，所述载体基因组包括核酸分子，所述核酸分子包括AAV反向末端重复序列和对产物进行编码的非AAV核酸序列，所述非AAV核酸序列可操作地连接到引导所述产物在宿主细胞中的表达的序列。

2.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述脱酰胺化的天冬酰胺被脱酰胺化为天冬氨酸、异天冬氨酸、相互转化的天冬氨酸/异天冬氨酸对或其组合。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的rAAV，其中所述衣壳进一步包括一种或多种脱酰胺化的谷氨酰胺，所述一种或多种脱酰胺化的谷氨酰胺被脱酰胺化为(α)-谷氨酸、γ-谷氨酸、相互转化的(α)-谷氨酸/γ-谷氨酸对或其组合。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的rAAV，其中所述AAVrh79衣壳包括具有以下中的一种或多种的亚群体：

(a)所述vp1蛋白的基于SEQ ID NO:2的编号定位于位置57处的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少75％的天冬酰胺(N)被脱酰胺化；

(b)所述vp1、v2和vp3蛋白的基于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的残基编号位于位置263中的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少75％的N被脱酰胺化；

(c)所述vp1、v2和vp3蛋白的基于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的残基编号位于位置385中的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少70％的N被脱酰胺化；和/或

(d)所述vp1、v2和vp3蛋白的基于SEQ ID NO:2的氨基酸序列的残基编号位于位置514中的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少85％的N被脱酰胺化。