[发明专利]使用质谱法基于假设检验分析高维数据用于评估复合有机分子之间的相似性

说明书

本发明开发了假设检验方法来分析高维LC‑MS数据，以评价在参考药物和仿制品之间的相似性程度。

相关申请的交叉引用

本申请要求从2018年9月3日提交的美国临时专利申请序列号62726342(以下称为US62726342)和2019年8月2日提交的美国非临时(实用)专利申请序列号16/530544(以下称为US16/530544)的优先权。US62726342和US16/530544的全部内容通过引用并入本文。

背景技术

醋酸格拉替雷(Glatiramer acetate，GA)为合成的多肽的复合异质性混合物，被美国食品和药物管理局(FDA)被批准作为免疫调节药物用于治疗复发缓解型多发性硬化症(relapsing-remitting multiple sclerosis)，复发缓解型多发性硬化症为年轻的成年人最常见的致残性神经系统疾病。

醋酸格拉替雷(GA)为克帕松^@(COPAXONE^@)(Teva Pharmaceutical IndustriesLtd.,以色列)的活性成分，包括合成的多肽混合物的乙酸盐，所述合成的多肽混合物含有四种天然存在的氨基酸：L-谷氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸和L-赖氨酸，据报道平均摩尔分数分别为0.141，0.427，0.095和0.338。克帕松^@(COPAXONE^@)的平均分子量在4,700和11,000道尔顿之间。在对照临床试验中，克帕松被证实在2年内复发率减少75％，并显著减少多发性硬化症的残疾的发展，其具有长期功效，安全性和耐受性。由于克帕松的广泛使用和相对较高的成本，导致对GA的其他仿制版本的发展的渐进需求，以便增加该药物的可负担性和可及性。

GA为一种非生物学复合药物(NBCDs)。多年来，使用药剂等效性和生物等效性的概念已经充分建立了稳健的监管系统，用于开发小分子药物的仿制版本，所述小分子药物仿制版本能够被充分鉴定和表征。然而，对于生物制剂和NBCDs的监管政策和分析方法仍正在开发中。因为NBCDs经常是不能被充分表征的合成的复合大分子/混合物，因此建议基于与参考列表药物的“相似性”对其进行评估，如生物制品的“生物仿制药方法”一样。

在GA中，存在着超过10³⁶种可能的理论上的序列，这点使得其成分既不是可充分鉴定的，甚至也不是通过最新的分析技术可量化的。因此，没有两种GA能够被证明是“同一的”。为了比较GA药物，已经进行了各种化学分析，包括通过凝胶渗透色谱的分子质量分布谱，通过毛细管电泳的肽图谱，用Edman降解法进行的N-末端的相对氨基酸水平，通过圆二色光谱的二级结构表征，和通过反相高效液相色谱法(RP-HPLC)的蛋白水解消化谱。

发明内容

本发明开发了假设检验方法以分析高维LC-MS数据，以便评价在参考药物和仿制品之间的相似性程度。发明人提出的假设检验方法的一个特征为，考虑两种样品组之间所有的数据点的差异。此外，即使对于少量的样品，附加的重采样技术也能够引入稳健的推断程序。这些特征导致从这种方法获得稳健的结果。

附图说明

图1(a)示出了一批共聚物-1样品的7个重复样品的基峰色谱图。

图1(b)示出了一批次的阴性对照的7个重复样品的基峰色谱图。

图1(c)示出了10个批次的克帕松和一批共聚物-1样品的基峰色谱图。

图1(d)示出了10个批次的克帕松和一批次的阴性样品的基峰色谱图。色谱图显示，在前7min内，克帕松与阴性对照之间有若干个不同的峰。

图2(a)示出了用于在克帕松和克帕松之间进行比较的，来自偏差平方总和(sumof squared deviation)测试程序的10,000个bootstrap估计的分布。